వైల్డ్ టాక్ DNA పాలిమరేస్
Taq DNA పాలిమరేస్ అనేది థర్మస్ ఆక్వాటికస్ YT-1 నుండి థర్మోస్టేబుల్ DNA పాలిమరేస్, ఇది 5′→3′ పాలిమరేస్ కార్యాచరణ మరియు 5´ ఫ్లాప్ ఎండోన్యూకలీస్ కార్యాచరణను కలిగి ఉంటుంది.
భాగాలు
| భాగం | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× టాక్ బఫర్ | 2×1 మి.లీ | 2×10 మి.లీ | 2×50 మి.లీ | 5×200 మి.లీ |
| టాక్ DNA పాలిమరేస్ (5 U/μL) | 0.1 మి.లీ | 1 మి.లీ | 5 మి.లీ | 5×10 మి.లీ |
నిల్వ పరిస్థితి
రవాణా 0°C కంటే తక్కువ మరియు -25°C~-15°C వద్ద నిల్వ చేయబడుతుంది.
యూనిట్ నిర్వచనం
ఒక యూనిట్ 75°C వద్ద 30 నిమిషాలలో 15 nmol dNTPని యాసిడ్ కరగని పదార్థంలో చేర్చే ఎంజైమ్ మొత్తంగా నిర్వచించబడింది.
నాణ్యత నియంత్రణ
1.ప్రోటీన్ స్వచ్ఛత పరీక్ష (SDS-PAGE):Taq DNA పాలిమరేస్ యొక్క స్వచ్ఛత SDS-PAGE విశ్లేషణ ద్వారా ≥95% నిర్ణయించబడింది.
2.Endonuclease కార్యాచరణ:37 ℃ వద్ద 16 గంటల పాటు 1 μg λDNAతో కనిష్టంగా 5 U Taq DNA పాలిమరేస్ నిర్ణయించినట్లుగా గుర్తించదగిన క్షీణతను కలిగి ఉండదు.
3.Exonuclease కార్యాచరణ:37 ℃ వద్ద 16 గంటల పాటు 1 μg λ -హింద్ Ⅲ డైజెస్ట్ DNAతో కనీసం 5 U Taq DNA పాలిమరేస్ నిర్ణయించినట్లుగా గుర్తించదగిన క్షీణతను కలిగి ఉండదు.
4.నికేస్ కార్యాచరణ:37°C వద్ద 16 గంటలపాటు 1 μg pBR322 DNAతో కనిష్టంగా 5 U Taq DNA పాలిమరేస్ నిర్ణయించిన విధంగా గుర్తించదగిన క్షీణతను కలిగి ఉండదు.
5.RNase కార్యాచరణ:37°C వద్ద 16 గంటల పాటు 1.6 μg MS2 RNAతో కనిష్టంగా 5 U Taq DNA పాలిమరేస్‌ని నిర్ణయించిన విధంగా గుర్తించదగిన క్షీణత ఉండదు.
6.E. కోలిDNA:5 U యొక్క Taq DNA పాలిమరేస్ E. coli 16S rRNA లోకస్ కోసం ప్రత్యేకమైన ప్రైమర్‌లతో TaqMan qPCRని ఉపయోగించి E. కోలి జెనోమిక్ DNA ఉనికి కోసం పరీక్షించబడింది.E. కోలి జన్యుసంబంధమైన DNA కాలుష్యం ≤1 కాపీ.
7.PCR యాంప్లిఫికేషన్ (5.0 kb లాంబ్డా DNA)- PCR యాంప్లిఫికేషన్ యొక్క 25 చక్రాల కోసం 5 యూనిట్ల Taq DNA పాలిమరేస్‌తో 5 ng లాంబ్డా DNA కలిగి ఉన్న 50 µL ప్రతిచర్య ఆశించిన 5.0 kb ఉత్పత్తిని అందిస్తుంది.
ప్రతిచర్య సెటప్
| భాగాలు | వాల్యూమ్ |
| టెంప్లేట్ DNAa | ఐచ్ఛికం |
| 10 μM ఫార్వర్డ్ ప్రైమర్ | 1 μL |
| 10 μM రివర్స్ ప్రైమర్ | 1 μL |
| dNTP మిక్స్ (ఒక్కొక్కటి 10mM) | 1 μL |
| 10×టాక్ బఫర్ | 5 μL |
| టాక్ DNA పాలిమరేస్బి | 0.25 μL |
| న్యూక్లీజ్ లేని నీరు | 50 μL వరకు |
గమనికలు:
1) విభిన్న టెంప్లేట్‌ల యొక్క సరైన ప్రతిచర్య ఏకాగ్రత భిన్నంగా ఉంటుంది.కింది పట్టిక 50 µL ప్రతిచర్య వ్యవస్థ యొక్క సిఫార్సు చేయబడిన టెంప్లేట్ వినియోగాన్ని చూపుతుంది.
| DNA | మొత్తం |
| జెనోమిక్ | 1 ng-1 μg |
| ప్లాస్మిడ్ లేదా వైరల్ | 1 pg-1 ng |
2) ప్రత్యేక అనువర్తనాల్లో Taq DNA పాలిమరేస్ యొక్క సరైన సాంద్రత 0.25 µL~1 µL వరకు ఉండవచ్చు.
స్పందనకార్యక్రమం
| దశ | ఉష్ణోగ్రత(°C) | సమయం | సైకిళ్లు |
| ప్రారంభ డీనాటరేషన్a | 95 ℃ | 5 నిమిషాలు | - |
| డీనాటరేషన్ | 95 ℃ | 15-30 సె | 30-35 సైకిళ్లు |
| ఎనియలింగ్బి | 60 ℃ | 15 సె | |
| పొడిగింపు | 72 ℃ | 1kb/నిమి | |
| చివరి పొడిగింపు | 72 ℃ | 5 నిమిషాలు | - |
గమనికలు:
1) ప్రారంభ డీనాటరేషన్ పరిస్థితి చాలా యాంప్లిఫికేషన్ ప్రతిచర్యలకు అనుకూలంగా ఉంటుంది మరియు టెంప్లేట్ నిర్మాణం యొక్క సంక్లిష్టత ప్రకారం సవరించబడుతుంది.టెంప్లేట్ నిర్మాణం సంక్లిష్టంగా ఉంటే, ప్రారంభ డీనాటరేషన్ ప్రభావాన్ని మెరుగుపరచడానికి ప్రీ-డినాటరేషన్ సమయాన్ని 5 - 10 నిమిషాలకు పొడిగించవచ్చు.
2) ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రత ప్రైమర్ యొక్క Tm విలువకు అనుగుణంగా సర్దుబాటు చేయాలి, ఇది సాధారణంగా ప్రైమర్ యొక్క Tm విలువ కంటే 3~5 ℃ తక్కువగా సెట్ చేయబడుతుంది;సంక్లిష్టమైన టెంప్లేట్‌ల కోసం, ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రతను సర్దుబాటు చేయడం మరియు సమర్థవంతమైన విస్తరణను సాధించడానికి పొడిగింపు సమయాన్ని పొడిగించడం అవసరం.
