సూపర్‌స్టార్ట్ qPCR ప్రీమిక్స్ ప్లస్-UNG
పిల్లి సంఖ్య: HCB5071E
సూపర్‌స్టార్ట్ qPCR ప్రీమిక్స్ ప్లస్-UNG అనేది ప్రోబ్-బేస్డ్ డిటెక్షన్‌ని ఉపయోగించి రియల్ టైమ్ PCR గుణాత్మక మరియు పరిమాణాత్మక ప్రతిచర్యల కోసం రూపొందించబడిన ఒక ప్రత్యేక రియాజెంట్, ప్రత్యేకంగా లైయోఫైలైజేషన్ ప్రక్రియల కోసం అభివృద్ధి చేయబడింది.ఇది ఒక నవల హాట్-స్టార్ట్ ఎంజైమ్ హాట్‌స్టార్ట్ టాక్ ప్లస్ (DG)ని కలిగి ఉంది, ఇది దాని టాక్ ఎంజైమ్ కార్యాచరణను గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద మూసివేయబడుతుంది, తక్కువ ఉష్ణోగ్రత పరిస్థితులలో ప్రైమర్ నాన్-స్పెసిఫిక్ ఎనియలింగ్ లేదా ప్రైమర్ డైమర్ ఏర్పడటం వల్ల కలిగే నిర్దిష్ట-కాని విస్తరణను సమర్థవంతంగా నిరోధిస్తుంది, తద్వారా మెరుగుపడుతుంది. యాంప్లిఫికేషన్ రియాక్షన్ యొక్క విశిష్టత.ఈ రియాజెంట్ ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన qPCR నిర్దిష్ట బఫర్ మరియు UNG/dUTP కాలుష్య నిరోధక వ్యవస్థను వేగంగా వేడి-ప్రారంభాన్ని సాధించడానికి ఉపయోగిస్తుంది, qPCR ప్రతిచర్యల సామర్థ్యాన్ని మరియు సున్నితత్వాన్ని బాగా మెరుగుపరుస్తుంది.ఇది విస్తృత శ్రేణి పరిమాణ ప్రాంతాలలో మంచి ప్రామాణిక వక్రతలను పొందగలదు మరియు పరిమాణాన్ని ఖచ్చితంగా నిర్వహించగలదు, అవశేష PCR ఉత్పత్తులు లేదా ఏరోసోల్ కాలుష్యం వలన సంభవించే తప్పుడు సానుకూల విస్తరణను సమర్థవంతంగా నివారిస్తుంది.అప్లైడ్ బయోసిస్టమ్స్, ఎప్పెండోర్ఫ్, బయో-రాడ్ మరియు రోచె మొదలైన తయారీదారుల నుండి చాలా ఫ్లోరోసెంట్ క్వాంటిటేటివ్ PCR సాధనాలకు ఈ రియాజెంట్ అనుకూలంగా ఉంటుంది మరియు లైయోఫైలైజ్డ్ రూపంలో మంచి స్థిరత్వాన్ని ప్రదర్శిస్తుంది.
రియాజెంట్ కూర్పు
1. 5×HotstartPremix ప్లస్-UNG (Mg2+ఉచిత) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×లైప్రొటెక్టెంట్ (ఐచ్ఛికం)
నిల్వ పరిస్థితులు
-20℃ వద్ద దీర్ఘకాలిక నిల్వ;4℃ వద్ద 3 నెలల వరకు నిల్వ చేయవచ్చు.ఉపయోగం ముందు బాగా కలపండి మరియుపదేపదే గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం నివారించండి.
సైక్లింగ్ ప్రోటోకాల్
| విధానము | టెంప్ | సమయం | చక్రం |
| జీర్ణక్రియ | 50℃ | 2 నిమి | 1 |
| పాలిమరేస్ యాక్టివేషన్ | 95℃ | 1~5 నిమి | 1 |
| డెనాచర్ | 95℃ | 10~20 సె | 40-50 |
| అన్నేలింగ్ మరియు పొడిగింపు | 56~64℃ | 20~60 సె | 40-50 |
qPCR లిక్విడ్ రియాక్షన్ Syకాండం తయారీ
|
కూర్పు |
25µL వాల్యూమ్ |
50µL వాల్యూమ్ |
చివరి ఏకాగ్రత |
| 5×HotstartPremix ప్లస్-UNG(Mg2+ఉచిత) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 మి.మీ |
| 4× లైప్రొటెక్టెంట్1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×ప్రైమర్-ప్రోబ్ మిక్స్2 | 1µL | 2µL | 1× |
| టెంప్లేట్ DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL వరకు | 50µL వరకు | —— |
1. ప్రైమర్‌ల కోసం 0.2μM తుది గాఢత సాధారణంగా మంచి ఫలితాలను ఇస్తుంది;ప్రతిచర్య పనితీరు తక్కువగా ఉన్నప్పుడు, అవసరమైన విధంగా 0.2-1μM పరిధిలో ప్రైమర్ ఏకాగ్రతను సర్దుబాటు చేయండి.సరైన కలయికలను కనుగొనడానికి గ్రేడియంట్ ప్రయోగాల ద్వారా ప్రోబ్ ఏకాగ్రత సాధారణంగా 0.1-0.3μM పరిధిలో ఆప్టిమైజ్ చేయబడుతుంది.
2. వివిధ రకాల టెంప్లేట్‌లలో ఉన్న లక్ష్య జన్యువుల కాపీ సంఖ్య మారుతూ ఉంటుంది;అవసరమైతే, సరైన టెంప్లేట్ జోడింపు మొత్తాన్ని నిర్ణయించడానికి గ్రేడియంట్ డైల్యూషన్ చేయవచ్చు.
3. ఈ వ్యవస్థను లైయోఫైలైజ్ చేయవచ్చు;వినియోగదారులు ఫ్రీజింగ్-ఎండబెట్టడం అవసరాలు లేకుండా ఈ సిస్టమ్‌ను ఉపయోగించినప్పుడు, 4×లైయోప్రొటెక్టెంట్‌ను ఎంపిక చేసి జోడించవచ్చు; ఫ్రీజ్-ఎండిన ఉత్పత్తులు అవసరమైతే, లిక్విడ్ రియాజెంట్ల దశ ఉత్పత్తి పనితీరు ధ్రువీకరణ సమయంలో, లైయోఫైలైజ్డ్ సిస్టమ్ భాగాలతో స్థిరత్వాన్ని నిర్ధారించడానికి ఇది తప్పనిసరిగా 4×లైయోప్రొటెక్టెంట్‌ను జోడించాలి. మరియు ప్రభావాలు.
సిస్టమ్ ఉపయోగించినప్పుడుd ఫ్రీజ్-ఎండబెట్టడం కోసం, సిద్ధం వ్యవస్థ as క్రింది:
| కూర్పు | 25µL ప్రతిచర్య వ్యవస్థ |
| 5 ×HotstartPremix ప్లస్-UNG (Mg2+ఉచిత) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4× లైప్రొటెక్టెంట్ | 6.25µL |
| 25×ప్రైమర్-ప్రోబ్ మిక్స్ | 1µL |
| ddH2O | 18~20µL వరకు |
* ఫ్రీజ్-ఎండబెట్టడం కోసం ఇతర వ్యవస్థలు అవసరమైతే, దయచేసి విడిగా సంప్రదించండి.
లియోఫిలైజేషన్ ప్రక్రియss
| విధానము | టెంప్ | సమయం | పరిస్థితి | ఒత్తిడి |
| ముందుగా గడ్డకట్టడం | 4℃ | 30 నిమి | పట్టుకోండి |
1 atm |
| -50℃ | 60 నిమి | శీతలీకరణ | ||
| -50℃ | 180 నిమి | పట్టుకోండి | ||
| ప్రాథమిక ఎండబెట్టడం | -30℃ | 60 నిమి | వేడి చేయడం |
అల్టిమేట్ వాక్యూమ్ |
| -30℃ | 70 నిమి | పట్టుకోండి | ||
| సెకండరీ ఎండబెట్టడం | 25℃ | 60 నిమి | వేడి చేయడం |
అల్టిమేట్ వాక్యూమ్ |
| 25℃ | 300 నిమి | పట్టుకోండి |
2. పై లైయోఫైలైజేషన్ ప్రక్రియ సూచన కోసం మాత్రమే.విభిన్న ఉత్పత్తి రకాలు మరియు వివిధ ఫ్రీజ్-డ్రైయర్‌లు వేర్వేరు పారామితులను కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి వాస్తవ ప్రకారం సర్దుబాట్లు చేయవచ్చుఉపయోగం సమయంలో పరిస్థితులు.
3. వివిధ లైయోఫైలైజేషన్ ప్రక్రియలు లైయోఫైలైజ్ చేయబడిన వివిధ బ్యాచ్ పరిమాణాలకు అనుకూలంగా ఉండవచ్చుఉత్పత్తులు, కాబట్టి పెద్ద-స్థాయి ఉత్పత్తికి ఉపయోగించినప్పుడు తగినంత పరీక్ష ధ్రువీకరణ తప్పనిసరిగా నిర్వహించబడాలి.
లైయోఫిలైజ్ ఉపయోగించడం కోసం సూచనd పొడి
1. లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్‌ను క్లుప్తంగా సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి;
2. లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్‌కి న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ టెంప్లేట్‌ను జోడించండి మరియు 25µL వరకు నీటిని జోడించండి;
3. సెంట్రిఫ్యూగేషన్ ద్వారా బాగా కలపండి మరియు యంత్రంపై అమలు చేయండి.
నాణ్యత నియంత్రణ:
1. ఫంక్షనల్ టెస్టింగ్: qPCR యొక్క సున్నితత్వం, నిర్దిష్టత, పునరుత్పత్తి.
2. ఎక్సోజనస్ న్యూక్లీస్ యాక్టివిటీ లేదు, ఎక్సోజనస్ ఎండో/ఎక్సోన్యూక్లీస్ కాలుష్యం లేదు.
సాంకేతిక సమాచారం:
1. సూపర్‌స్టార్ట్ qPCR ప్రీమిక్స్ ప్లస్-UNG ఒక నవల హాట్-స్టార్ట్ ఎంజైమ్‌ను ఉపయోగిస్తుంది, ఇది 1~5 నిమిషాల్లో వేగవంతమైన వేడి-ప్రారంభాన్ని అనుమతిస్తుంది;ప్రత్యేక బఫర్ సూత్రీకరణ ద్వారా ఇది మల్టీప్లెక్స్ ఫ్లోరోసెంట్ క్వాంటిటేటివ్ PCR ప్రతిచర్యలకు అనుకూలంగా ఉంటుంది.
2. ఇది అధిక నిర్దిష్టతను కలిగి ఉంది, ఇది ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ PCR పరిమితి గుర్తింపు యొక్క సున్నితత్వాన్ని గణనీయంగా మెరుగుపరుస్తుంది, యాంప్లిఫికేషన్ వక్రతలను సాధారణీకరించడం, ఫ్లోరోసెన్స్ విలువ తక్కువ సాంద్రత కలిగిన టెంప్లేట్‌ల వద్ద స్పష్టమైన మెరుగుదలని పొందడం, అధిక సున్నితత్వం ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ PCR డిటెక్షన్ రియాజెంట్‌లకు అనుకూలంగా ఉంటుంది.
3. తక్కువ ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రత లేదా 200bp శకలాలు కంటే ఎక్కువ ఉన్న ప్రైమర్‌ల కోసం, 3-దశల పద్ధతి సిఫార్సు చేయబడింది.
4. dUTP యొక్క వినియోగ సామర్థ్యం మరియు UNG ఎంజైమ్‌కు సున్నితత్వం వేర్వేరు లక్ష్య జన్యువులకు భిన్నంగా ఉంటాయి, కనుక UNG వ్యవస్థను ఉపయోగించడం వలన గుర్తింపు సున్నితత్వం తగ్గుతుంది, ప్రతిచర్య వ్యవస్థను సర్దుబాటు చేయాలి మరియు ఆప్టిమైజ్ చేయాలి.సాంకేతిక మద్దతు అవసరమైతే దయచేసి మా కంపెనీని సంప్రదించండి.
5. యాంప్లిఫికేషన్‌కు ముందు మరియు తర్వాత ప్రత్యేక ప్రాంతాలు మరియు పైపెట్‌లను ఉపయోగించండి, ఆపరేషన్ సమయంలో చేతి తొడుగులు ధరించండి మరియు వాటిని తరచుగా భర్తీ చేయండి;PCR ఉత్పత్తుల ద్వారా నమూనాల కాలుష్యాన్ని తగ్గించడానికి PCR పూర్తయిన తర్వాత ప్రతిచర్య ట్యూబ్‌ను తెరవవద్దు.
