ఫాస్ట్ యాంప్లి RT-qPCR ప్రీమిక్స్ ప్లస్-UNG
పిల్లి సంఖ్య: HCB5144E
ఫాస్ట్ యాంప్లి RT-qPCR ప్రీమిక్స్ ప్లస్-UNG ప్రత్యేకంగా లైయోఫైలైజేషన్ ప్రక్రియల కోసం అభివృద్ధి చేయబడింది, ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిఫికేషన్ (టాక్మాన్ ప్రోబ్) ఆర్ఎన్ఏ యాంప్లిఫికేషన్ డిటెక్షన్ని కలిగి ఉన్న నియోక్రిప్ట్ రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్టేజ్ మరియు ర్యాపిడ్ యాంప్లిఫికేషన్ DNA పాలిమరేస్ను కలిగి ఉంటుంది, ఇది జన్యుపరంగా మార్పు చేయబడిన మరియు స్క్రీనింగ్ ద్వారా పొందిన PC20 amplని పూర్తి చేయగలదు. - 40 నిమిషాలు.ఈ రియాజెంట్ అధిక రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ మరియు PCR యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉండే అధిక నిరోధక-సహనాన్ని నిర్ధారిస్తుంది, తక్కువ-గాఢత కలిగిన RNA నమూనాల అధిక-సున్నితత్వ విస్తరణకు తగినది.విస్తృత పరిమాణాత్మక పరిధిలో మంచి ప్రామాణిక వక్రరేఖను పొందవచ్చు మరియు పరిమాణీకరణ ఖచ్చితంగా నిర్వహించబడుతుంది.ఈ రియాజెంట్ యాంటీ-ఇన్హిబిషన్ యాంప్లిఫికేషన్ ఎంజైమ్ మరియు UNG ఎంజైమ్ యొక్క మిశ్రమ ఎంజైమ్ను ఉపయోగిస్తుంది, అలాగే dUTPని కలిగి ఉన్న ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన బఫర్ సిస్టమ్ను ఉపయోగిస్తుంది.ఇది ఇన్హిబిటర్లను కలిగి ఉన్న నమూనాలలో లక్ష్య జన్యువు యొక్క మంచి విస్తరణను సాధించడమే కాకుండా, PCR అవశేషాలు మరియు ఏరోసోల్ కాలుష్యం వల్ల కలిగే తప్పుడు సానుకూల విస్తరణను కూడా సమర్థవంతంగా నిరోధించగలదు.అప్లైడ్ బయోసిస్టమ్స్, ఎపెన్డార్ఫ్, బయో-రాడ్, రోచె మొదలైన చాలా ఫ్లోరోసెంట్ క్వాంటిటేటివ్ PCR సాధనాలకు ఈ రియాజెంట్ అనుకూలంగా ఉంటుంది.ఈ రియాజెంట్ మంచి లైయోఫైలైజ్డ్ రూపం మరియు ఉత్పత్తి స్థిరత్వాన్ని పొందేందుకు లైయోఫైలైజేషన్ కోసం ఉపయోగించవచ్చు.
రియాజెంట్ కూర్పు
1. 12.5×FastAmpli పార్ట్ టాక్/UNG మిక్స్ (dNTPలతో) (DG)
2. 50× FastAmpli పార్ట్ RTase (DG)
3. 5 ×FastAmpliRT బఫర్ (DG)
4. 4 × లైప్రొటెక్టెంట్ (ఐచ్ఛికం) (DG)
నిల్వ పరిస్థితులు
-20℃ వద్ద దీర్ఘకాలానికి, 4℃ వద్ద 3 నెలల వరకు నిల్వ చేయవచ్చు.ఉపయోగం ముందు బాగా కలపండి మరియు నివారించండితరచుగా ఫ్రీజ్-కరిగించడం.
సైక్లింగ్ ప్రోటోకాల్
|
దశ |
ఉష్ణోగ్రత | రెగ్యులర్ PCR విధానము | వేగవంతమైన PCRవిధానము |
సైకిళ్లు |
| వ్యవధి | వ్యవధి | |||
| రివర్స్లిప్యంతరీకరణ | 50℃ | 15 నిమి | 5 నిమి | పట్టుకోండి |
| పాలిమరేస్యాక్టివేషన్ | 95℃ | 1-5 నిమి | 1-2 నిమి | పట్టుకోండి |
| డెనాచర్ | 95℃ | 10-20 సె | 1-3 సె | 40-50 |
| అన్నేలింగ్/ఎక్స్టెన్షన్ | 56-64℃ | 20-60 సె | 3-20 సె |
RT-qPCR లిక్విడ్ రియాక్ట్అయాన్ వ్యవస్థ
| కూర్పు | 25µL వాల్యూమ్ | 50µL వాల్యూమ్ | ఏకాగ్రత |
| 5×FastAmpli RT బఫర్ | 5µL | 10µL | 1× |
| 12.5×ఫాస్ట్అంప్లి పార్ట్ టాక్/UNG మిక్స్ (dNTPలతో) | 2µL | 4µL | 1× |
| 50× FastAmpli పార్ట్ RTase | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 4× లైప్రొటెక్టెంట్ | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×ప్రైమర్-ప్రోబ్ మిక్స్ | 1µL | 2µL | 1× |
| టెంప్లేట్ RNA | - | - | - |
| ddH2O | 25µL వరకు | 50µL వరకు | 1× |
1. ఈ వ్యవస్థ లైయోఫైలైజేషన్ వ్యవస్థ;వినియోగదారులు లైఫైలైజేషన్ అవసరాలు లేకుండా ఈ సిస్టమ్ను ఉపయోగించినప్పుడు, 4×లైప్రొటెక్టెంట్ని ఎంపిక చేసి జోడించవచ్చు;లైయోఫైలైజ్డ్ ఉత్పత్తులు అవసరమైతే, లిక్విడ్ రియాజెంట్ల దశ ఉత్పత్తి పనితీరు ధ్రువీకరణ సమయంలో, లైయోఫైలైజ్డ్ సిస్టమ్ భాగాలు మరియు ఎఫెక్ట్లతో అనుగుణ్యతను నిర్ధారించడానికి తప్పనిసరిగా 4×లైయోప్రొటెక్టెంట్ను జోడించాలి.
2. సాధారణ PCR విధానాన్ని ఉపయోగించినప్పుడు, ప్రైమర్ యొక్క తుది సాంద్రత సాధారణంగా 0.2μM.మెరుగైన ఫలితాల కోసం, ప్రైమర్ ఏకాగ్రతను 0.2- 1.0μM పరిధిలో ఆప్టిమైజ్ చేయవచ్చు.ప్రోబ్ ఏకాగ్రతను 0.1-0.3μM పరిధిలో ఆప్టిమైజ్ చేయవచ్చు.ప్రైమర్లు మరియు ప్రోబ్స్ యొక్క ఉత్తమ కలయికను కనుగొనడానికి ఏకాగ్రత ప్రవణత ప్రయోగాలు నిర్వహించబడతాయి.
3. వేగవంతమైన PCR యాంప్లిఫికేషన్ పద్ధతిని ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు, ప్రైమర్/ప్రోబ్ ఏకాగ్రతను పెంచడం, అలాగే ప్రైమర్ మరియు ప్రోబ్ శాతాన్ని సర్దుబాటు చేయడం ద్వారా మెరుగైన ఫలితం సాధించవచ్చు.
4. వివిధ రకాల టెంప్లేట్లు లక్ష్య జన్యువు యొక్క విభిన్న కాపీ సంఖ్యను కలిగి ఉంటాయి.అవసరమైతే, తగిన సరైన టెంప్లేట్ జోడింపు మొత్తాన్ని ఎంచుకోవడానికి గ్రేడియంట్ డైల్యూషన్ చేయవచ్చు.
లియోఫిలైజేషన్ సిస్టమ్ తయారీ
| కూర్పు | 25µL ప్రతిచర్య వ్యవస్థ |
| 5×FastAmpli RT బఫర్ | 5µL |
| 12.5×FastAmpli పార్ట్ టాక్/UNG మిక్స్ (dNTPలతో) (DG) | 2µL |
| 50×FastAmpli పార్ట్ RTase (DG) | 0.5µL |
| 4×లైయోప్రొటెక్టెంట్ | 6.25µL |
| 25×ప్రైమర్-ప్రోబ్ మిక్స్ | 1µL |
| ddH2O | 18~20µL వరకు |
* లైఫైలైజేషన్ కోసం ఇతర వ్యవస్థలు అవసరమైతే, దయచేసి విడిగా సంప్రదించండి.
లియోఫిలైజేషన్ ప్రోess
| విధానము | టెంప్ | సమయం | పరిస్థితి | ఒత్తిడి |
| ఘనీభవన | 4℃ | 30 నిమి | పట్టుకోండి | 1 atm |
| -50℃ | 60 నిమి | శీతలీకరణ | ||
| -50℃ | 180 నిమి | పట్టుకోండి | ||
| ప్రాథమిక ఎండబెట్టడం | -30℃ | 60 నిమి | వేడి చేయడం | అల్టిమేట్ వాక్యూమ్ |
| -30℃ | 720 నిమి | పట్టుకోండి | ||
| సెకండరీ ఎండబెట్టడం | 25℃ | 60 నిమి | వేడి చేయడం | అల్టిమేట్ వాక్యూమ్ |
| 25℃ | 300 నిమి | పట్టుకోండి |
1. ఈ లైయోఫైలైజేషన్ ప్రక్రియ 25µL ప్రతిచర్య వ్యవస్థ కోసం ఇన్-సిటు ఫ్రీజ్-ఎండబెట్టే ప్రక్రియ;ఫ్రీజ్-ఎండబెట్టడం పూసలు లేదా ఇతర ఇన్-సిటు ఫ్రీజ్-ఎండబెట్టడం ప్రక్రియలు అవసరమైతే, దయచేసి విడిగా విచారించండి.
2. పై లైయోఫైలైజేషన్ ప్రక్రియ సూచన కోసం మాత్రమే.విభిన్న ఉత్పత్తి రకాలు మరియు వివిధ ఫ్రీజ్-డ్రైయర్లు వేర్వేరు పారామితులను కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి ఉపయోగం సమయంలో వాస్తవ పరిస్థితులకు అనుగుణంగా సర్దుబాట్లు చేయవచ్చు.
3. వివిధ లైయోఫైలైజేషన్ ప్రక్రియలు వేర్వేరు బ్యాచ్ పరిమాణాల లైయోఫైలైజ్డ్ ఉత్పత్తులకు అనుకూలంగా ఉండవచ్చు, కాబట్టి పెద్ద-స్థాయి ఉత్పత్తి కోసం ఉపయోగించినప్పుడు తగినంత పరీక్ష ధ్రువీకరణను తప్పనిసరిగా నిర్వహించాలి.
లైయోఫిలిజ్ ఉపయోగించడం కోసం సూచనed పొడి
1. లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్ను క్లుప్తంగా సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి;
2. లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్కి న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ టెంప్లేట్ను జోడించండి మరియు 25µL వరకు నీటిని జోడించండి;
3. సెంట్రిఫ్యూగేషన్ ద్వారా బాగా కలపండి మరియు యంత్రంపై అమలు చేయండి.
నాణ్యత నియంత్రణ
1. ఫంక్షనల్ టెస్టింగ్: సున్నితత్వం, నిర్దిష్టత, RT-qPCR యొక్క పునరుత్పత్తి.
2. ఎక్సోజనస్ న్యూక్లీస్ యాక్టివిటీ లేదు, ఎక్సోజనస్ ఎండో/ఎక్సోన్యూక్లీస్ కాలుష్యం లేదు.
సాంకేతిక సమాచారం:
1. వేగవంతమైన DNA పాలిమరేస్ యొక్క యాంప్లిఫికేషన్ రేటు 1kb/10s కంటే తక్కువ కాదు.వేర్వేరు PCR సాధనాలు వేర్వేరు తాపన మరియు శీతలీకరణ వేగం, ఉష్ణోగ్రత నియంత్రణ మోడ్లు మరియు ఉష్ణ వాహకతను కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి మీ ప్రైమర్/ప్రోబ్ ఏకాగ్రత యొక్క ఆప్టిమైజేషన్ మరియు మీ నిర్దిష్ట వేగవంతమైన PCR పరికరంతో కలిపి నడుస్తున్న పద్ధతి చాలా అవసరం.
2. రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ సమయం విస్తరించాల్సిన భాగం యొక్క పొడవు ప్రకారం ఆప్టిమైజ్ చేయబడింది.పొడవైన శకలాల కోసం, రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ సమయాన్ని తగిన విధంగా పొడిగించవచ్చు.
3. ప్రైమర్ ప్రోబ్ యొక్క Tm విలువ మరియు ప్రతిచర్య యొక్క వాస్తవ పరిస్థితుల ఆధారంగా ఎనియలింగ్ పొడిగింపు ఉష్ణోగ్రతను ఆప్టిమైజ్ చేయాలి.
4. తక్కువ ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రత లేదా 200 bp శకలాలు కంటే ఎక్కువ ఉన్న ప్రైమర్ల కోసం, 3-దశల పద్ధతి సిఫార్సు చేయబడింది.
5. దయచేసి యాంప్లిఫికేషన్కు ముందు మరియు తర్వాత ప్రత్యేక ప్రాంతాలు మరియు పైపెట్లను ఉపయోగించండి, చేతి తొడుగులు ధరించండి మరియు వాటిని తరచుగా మార్చండి;PCR ఉత్పత్తుల ద్వారా నమూనాల కాలుష్యాన్ని తగ్గించడానికి PCR ప్రతిచర్య పూర్తయిన తర్వాత రియాక్షన్ ట్యూబ్ను తెరవవద్దు.
6. dUTP యొక్క వినియోగ సామర్థ్యం మరియు UNG ఎంజైమ్కు సున్నితత్వం వేర్వేరు లక్ష్య జన్యువులకు భిన్నంగా ఉంటాయి, కనుక UNG వ్యవస్థను ఉపయోగించడం వలన గుర్తింపు సున్నితత్వం తగ్గుతుంది, ప్రతిచర్య వ్యవస్థను సర్దుబాటు చేయాలి మరియు ఆప్టిమైజ్ చేయాలి.సాంకేతిక మద్దతు అవసరమైతే దయచేసి మమ్మల్ని సంప్రదించండి.
