ప్రొటీనేస్ K mNGS (ద్రవ)
ప్రొటీనేస్ K అనేది విస్తృత ఉపరితల విశిష్టతతో స్థిరమైన సెరైన్ ప్రోటీజ్.ఇది డిటర్జెంట్ల సమక్షంలో కూడా స్థానిక రాష్ట్రంలో అనేక ప్రోటీన్లను క్షీణింపజేస్తుంది.క్రిస్టల్ మరియు మాలిక్యులర్ స్ట్రక్చర్ అధ్యయనాల నుండి వచ్చిన సాక్ష్యం ఎంజైమ్ క్రియాశీల సైట్ ఉత్ప్రేరక త్రయం (Asp)తో సబ్‌టిలిసిన్ కుటుంబానికి చెందినదని సూచిస్తుంది.39-తన69-సర్224)బ్లాక్ చేయబడిన ఆల్ఫా అమైనో సమూహాలతో అలిఫాటిక్ మరియు సుగంధ అమైనో ఆమ్లాల కార్బాక్సిల్ సమూహానికి ప్రక్కనే ఉన్న పెప్టైడ్ బంధం చీలిక యొక్క ప్రధాన ప్రదేశం.ఇది సాధారణంగా దాని విస్తృత నిర్దిష్టత కోసం ఉపయోగించబడుతుంది.ఈ ప్రొటీనేజ్ K ప్రత్యేకంగా mNGS కోసం రూపొందించబడింది.ఇతర ప్రోటీనేజ్ K తో పోలిస్తే, ఇది అదే ఎంజైమాటిక్ పనితీరుతో తక్కువ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ కాలుష్యాన్ని కలిగి ఉంటుంది, ఇది దిగువ mNGS అప్లికేషన్‌ను మెరుగ్గా నిర్ధారిస్తుంది.
నిల్వ పరిస్థితులు
2 సంవత్సరాలకు 2-8℃
స్పెసిఫికేషన్
| స్వరూపం | రంగులేని నుండి లేత గోధుమరంగు ద్రవం |
| కార్యాచరణ | ≥800 U/ml |
| ప్రోటీన్ ఏకాగ్రత | ≥20 mg/ml |
| నికేస్ | ఏదీ కనుగొనబడలేదు |
| DNase | ఏదీ కనుగొనబడలేదు |
| RNase | ఏదీ కనుగొనబడలేదు |
లక్షణాలు
| EC నంబర్ | 3.4.21.64(ట్రిటిరాచియం ఆల్బమ్ నుండి రీకాంబినెంట్) |
| ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్ | 7.81 |
| వాంఛనీయ pH | 7.0- 12.0 అంజీర్ 1 |
| వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత | 65 ℃ Fig. 2 |
| pH స్థిరత్వం | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 h) Fig. 3 |
| ఉష్ణ స్థిరత్వం | 50 ℃ క్రింద (pH 8.0, 30 నిమి) Fig. 4 |
| నిల్వ స్థిరత్వం | 25 ℃ వద్ద 12 నెలల పాటు 90% కంటే ఎక్కువ కార్యాచరణ |
| యాక్టివేటర్లు | SDS, యూరియా |
| నిరోధకాలు | డైసోప్రొపైల్ ఫ్లోరోఫాస్ఫేట్;phenylmethylsulfonyl ఫ్లోరైడ్ |
అప్లికేషన్లు
1. జెనెటిక్ డయాగ్నస్టిక్ కిట్
2. RNA మరియు DNA వెలికితీత కిట్‌లు
3. కణజాలాల నుండి నాన్-ప్రోటీన్ భాగాల సంగ్రహణ, DNA వంటి ప్రోటీన్ మలినాలు క్షీణించడంటీకాలు మరియు హెపారిన్ తయారీ
4. పల్సెడ్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా క్రోమోజోమ్ DNA తయారీ
5. వెస్ట్రన్ బ్లాట్
6. ఎంజైమాటిక్ గ్లైకోసైలేటెడ్ అల్బుమిన్ రియాజెంట్స్ ఇన్ విట్రో డయాగ్నసిస్
ముందుజాగ్రత్తలు
ఉపయోగించినప్పుడు లేదా బరువుగా ఉన్నప్పుడు రక్షిత చేతి తొడుగులు మరియు గాగుల్స్ ధరించండి మరియు ఉపయోగించిన తర్వాత బాగా వెంటిలేషన్ చేయండి.ఈ ఉత్పత్తి చర్మానికి అలెర్జీ ప్రతిచర్య మరియు తీవ్రమైన కంటి చికాకు కలిగించవచ్చు.పీల్చినట్లయితే, అది అలెర్జీ లేదా ఆస్తమా లక్షణాలు లేదా డిస్ప్నియాకు కారణం కావచ్చు.శ్వాసకోశ చికాకు కలిగించవచ్చు.
యూనిట్ నిర్వచనం
ఒక యూనిట్ (U) అనేది 1 μmol ఉత్పత్తి చేయడానికి కాసైన్‌ను హైడ్రోలైజ్ చేయడానికి అవసరమైన ఎంజైమ్ మొత్తంగా నిర్వచించబడింది.కింది పరిస్థితులలో నిమిషానికి టైరోసిన్.
కారకాల తయారీ
రియాజెంట్ I: 1g మిల్క్ కేసైన్‌ను 50ml 0.1M సోడియం ఫాస్ఫేట్ ద్రావణంలో (pH 8.0) కరిగించి, 65-70 ℃ నీటిలో 15 నిమిషాలు పొదిగించి, కదిలించి, కరిగించి, నీటితో చల్లబరిచి, సోడియం హైడ్రాక్సైడ్ ద్వారా pH 8.0కి సర్దుబాటు చేయబడుతుంది మరియు స్థిర పరిమాణంలో ఉంటుంది. 100మి.లీ.
కారకం II: 0.1M ట్రైక్లోరోఅసిటిక్ ఆమ్లం, 0.2M సోడియం అసిటేట్, 0.3M ఎసిటిక్ ఆమ్లం.
రియాజెంట్ III: 0.4M Na2CO3పరిష్కారం.
రియాజెంట్ IV: ఫోరింట్ రియాజెంట్ 5 సార్లు స్వచ్ఛమైన నీటితో కరిగించబడుతుంది.
రియాజెంట్ V: ఎంజైమ్ పలచన: 0.1M సోడియం ఫాస్ఫేట్ ద్రావణం (pH 8.0).
రీజెంట్ VI: టైరోసిన్ ద్రావణం: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml టైరోసిన్ 0.2తో కరిగించబడుతుందిM HCl.
విధానము
1. 0.5ml రియాజెంట్ I 37℃కి ముందుగా వేడెక్కింది, 0.5ml ఎంజైమ్ ద్రావణాన్ని జోడించి, బాగా కలపండి మరియు పొదిగేది10 నిమిషాలకు 37℃.
2. ప్రతిచర్యను ఆపడానికి 1ml రియాజెంట్ IIని జోడించండి, బాగా కలపండి మరియు 30నిమిషాల పాటు ఇంక్యుబేషన్ కొనసాగించండి.
3. సెంట్రిఫ్యూగేట్ ప్రతిచర్య పరిష్కారం.
4. 0.5ml సూపర్నాటెంట్ తీసుకోండి, 2.5ml రియాజెంట్ III, 0.5ml రియాజెంట్ IV జోడించండి, బాగా కలపండి మరియు 37℃ వద్ద పొదిగేది30 నిమిషాలకు.
5. OD660OD గా నిర్ణయించబడింది1;ఖాళీ నియంత్రణ సమూహం: ఎంజైమ్ స్థానంలో 0.5ml రియాజెంట్ V ఉపయోగించబడుతుందిOD నిర్ణయించడానికి పరిష్కారం660OD గా2, ΔOD=OD1-OD2.
6. L-టైరోసిన్ ప్రామాణిక వక్రరేఖ: 0.5mL విభిన్న సాంద్రత కలిగిన L-టైరోసిన్ ద్రావణం, 2.5mL రీజెంట్ III, 5mL సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లో 0.5mL రీజెంట్ IV, 30నిమిషాల పాటు 37℃లో పొదిగేది, OD కోసం గుర్తించడం660L-టైరోసిన్ యొక్క విభిన్న సాంద్రత కోసం, అప్పుడు ప్రామాణిక వక్రరేఖ Y=kX+b పొందబడింది, ఇక్కడ Y అనేది L-టైరోసిన్ గాఢత, X అనేది OD600.
లెక్కింపు
2: ప్రతిచర్య పరిష్కారం యొక్క మొత్తం వాల్యూమ్ (mL)
0.5: ఎంజైమ్ ద్రావణం యొక్క వాల్యూమ్ (mL)
0.5: క్రోమోజెనిక్ డిటర్మినేషన్ (mL)లో ఉపయోగించే ప్రతిచర్య ద్రవ పరిమాణం
10: ప్రతిచర్య సమయం (నిమి)
Df: పలుచన బహుళ
C: ఎంజైమ్ గాఢత (mg/mL)
ప్రస్తావనలు
1. వైగర్ యు & హిల్జ్ హెచ్. FEBS లెట్.(1972);23:77.
2. వైగర్ యు & హిల్జ్ హెచ్. బయోకెమ్.బయోఫీస్.Res.కమ్యూన్(1971);44:513.
3. హిల్జ్, హెచ్.ఎప్పటికి.,యూరో.J. బయోకెమ్.(1975);56:103–108.
4. సంబ్రూక్ జెet అల్., మాలిక్యులర్ క్లోనింగ్: ఎ లాబొరేటరీ మాన్యువల్, 2వ ఎడిషన్, కోల్డ్ స్ప్రింగ్ హార్బర్లాబొరేటరీ ప్రెస్, కోల్డ్ స్ప్రింగ్ హార్బర్ (1989).
బొమ్మలు
అత్తి.1 సర్వోత్తమమైనది pH
100mM బఫర్ పరిష్కారం: pH6.0-8.0, Na-ఫాస్ఫేట్;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, గ్లైసిన్-NaOH.ఎంజైమ్ గాఢత:1mg/mL
Fig.2 వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత
20 mM K-ఫాస్ఫేట్ బఫర్ pH 8.0లో ప్రతిచర్య.ఎంజైమ్ గాఢత: 1 mg/mL
Fig.3 pH స్థిరత్వం
25 ℃, 50 mM బఫర్ ద్రావణంతో 16 h-చికిత్స: pH 4.5- 5.5, అసిటేట్;pH 6.0-8.0, Na-ఫాస్ఫేట్;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0- 12.5, గ్లైసిన్-NaOH.ఎంజైమ్ గాఢత: 1 mg/mL
Fig.4 థర్మల్ స్థిరత్వం
50 mM Tris-HCl బఫర్‌తో 30 నిమిషాల చికిత్స, pH 8.0.ఎంజైమ్ గాఢత: 1 mg/mL
Fig.5 నిల్వ స్థిరత్వంty at 25℃
