మల్టీప్లెక్స్ వన్ స్టెప్ RT-qPCR ప్రీమిక్స్-UNG
పిల్లి సంఖ్య: HCB5145A
మల్టీప్లెక్స్ వన్ స్టెప్ RT-qPCR ప్రోబ్ కిట్ (UDG ప్లస్) అనేది టెంప్లేట్‌గా RNA ఆధారంగా మల్టీప్లెక్స్ క్వాంటిటేటివ్ PCR కిట్.ప్రయోగం ప్రక్రియలో, రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ మరియు క్వాంటిటేటివ్ PCR ఒకే ట్యూబ్‌లో నిర్వహించబడ్డాయి, ఇది ప్రయోగాత్మక ఆపరేషన్‌ను సులభతరం చేసింది మరియు కాలుష్య ప్రమాదాన్ని తగ్గించింది.ఈ కిట్‌లో, మొదటి స్ట్రాండ్ cDNA వేడి-నిరోధక రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ ద్వారా సమర్ధవంతంగా సంశ్లేషణ చేయబడింది మరియు హాట్‌స్టార్ట్ ట్యాగ్ DNA పాలిమరేస్ ద్వారా పరిమాణాత్మకంగా విస్తరించబడింది.కిట్‌లో ప్రధానంగా ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన MP బఫర్, ఎంజైమ్‌ల మిశ్రమం మొదలైనవి ఉన్నాయి. బఫర్ సొల్యూషన్ ఇప్పటికే Mgని కలిగి ఉంది2+మరియు dNTP.అదనంగా, నిర్దిష్ట-కాని PCR యాంప్లిఫికేషన్‌ను సమర్థవంతంగా నిరోధించగల మరియు బహుళ qPCR ప్రతిచర్యల యొక్క యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరిచే కారకాలు జోడించబడతాయి, ఇవి యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యాన్ని నిర్ధారించగలవు మరియు బహుళ యాంప్లిఫికేషన్ ప్రతిచర్య వరకు నిర్వహించగలవు.ఏరోసోల్ కాలుష్య ప్రమాదాన్ని సమర్థవంతంగా నిరోధించడానికి dUTP/UDG వ్యవస్థ జోడించబడింది.
భాగాలు
1. బఫర్
2. ఎంజైమ్ మిక్స్
స్పెసిఫికేషన్
| హాట్ స్టార్ట్ | అంతర్నిర్మిత హాట్ ప్రారంభం |
| గుర్తింపు పద్ధతి | ప్రైమర్-ప్రోబ్ డిటెక్షన్ |
| PCR పద్ధతి | ఒక దశ RT-qPCR |
| పాలిమరేస్ | టాక్ DNA పాలిమరేస్ |
| నమూనా రకం | DNA |
నిల్వ పరిస్థితులు
ఉత్పత్తి పొడి మంచుతో రవాణా చేయబడుతుంది మరియు 1 సంవత్సరం పాటు -25~-15℃ వద్ద నిల్వ చేయబడుతుంది.ఇది తరచుగా నివారించాలిఫ్రీజ్-కరిగించడం.విడిగా సేవ్ చేయాలని సిఫార్సు చేయబడింది.
సూచనలు
1.స్పందన వ్యవస్థ
| భాగాలు | వాల్యూమ్ (μL) | చివరి ఏకాగ్రత |
| 2 × MP బఫర్ | 12.5 | 1× |
| ఎంజైమ్ మిక్స్ | 1 | - |
| ప్రైమర్/ప్రోబ్ మిక్స్ (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| టెంప్లేట్ RNA | 1-10 | - |
| RNase ఉచిత H2O | 25 వరకు | - |
గమనికలు:
ఉపయోగం ముందు బాగా కలపాలని నిర్ధారించుకోండి, హింసాత్మక కంపనం వల్ల కలిగే అధిక బుడగలను నివారించండి.
a.ప్రైమర్ ఏకాగ్రత: మల్టీప్లెక్స్ ప్రైమర్‌తో సహా ప్రైమర్ మిక్స్, పరిస్థితిని బట్టి సరైన ప్రైమర్ ఏకాగ్రత 0.l మరియు 1.0μM మధ్య ఉండవచ్చు.
బి.ప్రోబ్ ఏకాగ్రత: మల్టీప్లెక్స్ ప్రోబ్ లేబులింగ్ తేడా ఫ్లోరోసెంట్ గ్రూప్‌తో సహా ప్రోబ్ మిక్స్, పరిస్థితిని బట్టి సరైన ప్రోబ్ ఏకాగ్రత 0.05 మరియు 0.5μM మధ్య ఉండవచ్చు.
సి.టెంప్లేట్ పలుచన: qPCR అత్యంత సున్నితమైనది మరియు టెంప్లేట్‌ను పలుచన చేయాలని సిఫార్సు చేయబడింది.నియంత్రణ Ct విలువ 20 మరియు 35 మధ్య అనుకూలంగా ఉంటుంది.
డి.సిస్టమ్ తయారీ: దయచేసి అల్ట్రా క్లీన్ వర్కింగ్ టేబుల్‌లో సిద్ధం చేయండి మరియు న్యూక్లీజ్ అవశేషాలు లేకుండా పైపెటర్ మరియు రియాక్షన్ ట్యూబ్;ఫిల్టర్ ఎలిమెంట్‌తో గన్ హెడ్‌ని ఉపయోగించమని సిఫార్సు చేయబడింది.క్రాస్ కాలుష్యం మరియు ఏరోసోల్ కాలుష్యాన్ని నివారించండి.
2. ఆప్టిమైజ్ చేసిన సైక్లింగ్ప్రోటోకాల్
| చక్రం అడుగు | టెంప్ | సమయం | సైకిళ్లు |
| రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ | 50℃a | 20 నిమిషాలు | 1 |
| ప్రారంభ-డినాటరేషన్ | 95℃ | 5 నిమిషాలు | 1 |
| యాంప్లిఫికేషన్ రియాక్షన్ | 95℃ | 15సె |
40-45 |
| 60℃ b | 30సె c |
గమనికలు:
a.రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్: ఉష్ణోగ్రత 42°C లేదా 50°Cని ఎంచుకోవచ్చు.
బి.యాంప్లిఫికేషన్ రియాక్షన్: డిజైన్ చేయబడిన ప్రైమర్‌ల Tm విలువ ప్రకారం ఉష్ణోగ్రత సర్దుబాటు చేయబడుతుంది.
సి.ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ అక్విజిషన్: దయచేసి ఇన్స్ట్రుమెంట్ మాన్యువల్ అవసరాలకు అనుగుణంగా ప్రయోగాత్మక విధానాన్ని సెట్ చేయండి.
గమనికలు
దయచేసి మీ ఆరోగ్యం మరియు భద్రతను నిర్ధారించడానికి ల్యాబ్ కోటు మరియు చేతి తొడుగులు వంటి అవసరమైన PPEని ధరించండి.
