మౌస్ జెనోటైపింగ్ కిట్

పిల్లి సంఖ్య: HCR2021A

ఈ ఉత్పత్తి DNA క్రూడ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ మరియు PCR యాంప్లిఫికేషన్ సిస్టమ్‌తో సహా మౌస్ జన్యురూపాలను వేగంగా గుర్తించడానికి రూపొందించబడిన కిట్.లైసిస్ బఫర్ మరియు ప్రొటీనేస్ కె ద్వారా సాధారణ చీలిక తర్వాత మౌస్ టెయిల్, చెవి, కాలి మరియు ఇతర కణజాలాల నుండి నేరుగా PCR యాంప్లిఫికేషన్ కోసం ఉత్పత్తిని ఉపయోగించవచ్చు.రాత్రిపూట జీర్ణం కాదు, ఫినాల్-క్లోరోఫామ్ వెలికితీత లేదా కాలమ్ శుద్దీకరణ, ఇది సరళమైనది మరియు ప్రయోగాల సమయాన్ని తగ్గిస్తుంది.ఉత్పత్తి 2kb వరకు లక్ష్య శకలాలు విస్తరించడానికి మరియు 3 జతల ప్రైమర్‌లతో మల్టీప్లెక్స్ PCR ప్రతిచర్యలకు అనుకూలంగా ఉంటుంది.2×మౌస్ టిష్యూ డైరెక్ట్ PCR మిక్స్ జన్యుపరంగా ఇంజనీరింగ్ చేయబడిన DNA పాలిమరేస్, Mgని కలిగి ఉంటుంది²⁺, dNTPలు మరియు అధిక యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం మరియు ఇన్హిబిటర్ టాలరెన్స్ అందించడానికి ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన బఫర్ సిస్టమ్, తద్వారా PCR ప్రతిచర్యలు టెంప్లేట్ మరియు ప్రైమర్‌లను జోడించడం ద్వారా మరియు ఉత్పత్తిని 1×కి రీహైడ్రేట్ చేయడం ద్వారా నిర్వహించబడతాయి.ఈ ఉత్పత్తితో విస్తరించిన PCR ఉత్పత్తి 3′ ముగింపులో ప్రముఖమైన "A" బేస్‌ను కలిగి ఉంటుంది మరియు శుద్ధి చేసిన తర్వాత TA క్లోనింగ్ కోసం నేరుగా ఉపయోగించవచ్చు.

భాగాలు

నిల్వ పరిస్థితులు

ఉత్పత్తులు -25~-15℃ వద్ద 2 సంవత్సరాలు నిల్వ చేయాలి.కరిగిన తర్వాత, లైసిస్ బఫర్‌ను స్వల్పకాలిక బహుళ ఉపయోగం కోసం 2~8℃ వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు మరియు ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు బాగా కలపాలి.

అప్లికేషన్

ఈ ఉత్పత్తి మౌస్ నాకౌట్ విశ్లేషణ, జన్యుమార్పిడి గుర్తింపు, జన్యురూపం మొదలైనవాటికి అనుకూలంగా ఉంటుంది.

లక్షణాలు

1.సాధారణ ఆపరేషన్: జన్యుసంబంధమైన DNAని సేకరించాల్సిన అవసరం లేదు;

2.విస్తృత అప్లికేషన్: వివిధ మౌస్ కణజాలాల ప్రత్యక్ష విస్తరణకు అనుకూలం.

సూచనలు

1.జన్యుసంబంధమైన DNA విడుదల

1) లైసేట్ తయారీ

లైస్ చేయవలసిన మౌస్ నమూనాల సంఖ్య ప్రకారం టిష్యూ లైసేట్ తయారు చేయబడుతుంది (టిష్యూ లైసేట్‌ను మోతాదు ప్రకారం ఆన్-సైట్‌లో తయారు చేయాలి మరియు ఉపయోగం కోసం పూర్తిగా కలపాలి), మరియు ఒకే నమూనాకు అవసరమైన కారకాల నిష్పత్తి క్రింది విధంగా ఉంటుంది:

2) నమూనా తయారీ మరియు లైసిస్

సిఫార్సు చేయబడిన కణజాల వినియోగం

క్లీన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లలో తగిన మొత్తంలో మౌస్ కణజాల నమూనాలను తీసుకోండి, ప్రతి సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌కు 200μL తాజా టిష్యూ లైసేట్‌ను జోడించి, వోర్టెక్స్ మరియు షేక్ చేయండి, ఆపై 55℃ వద్ద 30నిమిషాల పాటు పొదిగేది, ఆపై 3నిమిషాల పాటు 98℃ వద్ద వేడి చేయండి.

3) సెంట్రిఫ్యూగేషన్

5 నిమిషాల పాటు 12,000 rpm వద్ద లైసేట్ మరియు సెంట్రిఫ్యూజ్‌ను బాగా కదిలించండి.సూపర్‌నాటెంట్‌ను PCR యాంప్లిఫికేషన్ కోసం టెంప్లేట్‌గా ఉపయోగించవచ్చు.టెంప్లేట్ నిల్వ కోసం అవసరమైతే, సూపర్‌నాటెంట్‌ను మరొక స్టెరైల్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌కి బదిలీ చేయండి మరియు 2 వారాల పాటు -20℃ వద్ద నిల్వ చేయండి.

2.PCR యాంప్లిఫికేషన్

-20℃ నుండి 2×మౌస్ టిష్యూ డైరెక్ట్ PCR మిశ్రమాన్ని తీసివేసి, మంచు మీద కరిగించి, తలక్రిందులుగా కలపండి మరియు క్రింది పట్టిక ప్రకారం PCR ప్రతిచర్య వ్యవస్థను సిద్ధం చేయండి (మంచుపై పని చేయండి):

గమనిక:

ఎ) జోడించిన మొత్తం సిస్టమ్‌లో 1/10కి మించకూడదు మరియు ఎక్కువ జోడిస్తే, PCR యాంప్లిఫికేషన్ నిరోధించబడవచ్చు.

సిఫార్సు చేయబడిన PCR పరిస్థితులు

గమనిక:

ఎ) ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రత: ప్రైమర్ యొక్క Tm విలువకు సంబంధించి, ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రతను ప్రైమర్ +3~5℃ యొక్క చిన్న Tm విలువకు సెట్ చేయాలని సిఫార్సు చేయబడింది.

సాధారణ సమస్యలు మరియు పరిష్కారాలు

1.లక్ష్య స్ట్రిప్‌లు లేవు

1) అధిక లైసిస్ ఉత్పత్తి.అత్యంత సముచితమైన టెంప్లేట్ మొత్తాన్ని ఎంచుకోండి, సాధారణంగా సిస్టమ్‌లో 1/10 కంటే ఎక్కువ కాదు;

2) నమూనా పరిమాణం చాలా పెద్దది.లైసేట్‌ను 10 సార్లు పలుచన చేసి, ఆపై విస్తరించండి లేదా నమూనా పరిమాణాన్ని తగ్గించండి మరియు మళ్లీ లైసిస్ చేయండి;

3) కణజాల నమూనాలు తాజాగా లేవు.తాజా కణజాల నమూనాలను ఉపయోగించమని సిఫార్సు చేయబడింది;

4) పేలవమైన ప్రైమర్ నాణ్యత.ప్రైమర్ నాణ్యతను ధృవీకరించడానికి మరియు ప్రైమర్ డిజైన్‌ను ఆప్టిమైజ్ చేయడానికి యాంప్లిఫికేషన్ కోసం జెనోమిక్ DNAని ఉపయోగించండి.

2.నాన్-స్పెసిఫిక్ యాంప్లిఫికేషన్

1) ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రత చాలా తక్కువగా ఉంది మరియు చక్రం సంఖ్య చాలా ఎక్కువగా ఉంది.ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రతను పెంచండి మరియు చక్రాల సంఖ్యను తగ్గించండి;

2) టెంప్లేట్ ఏకాగ్రత చాలా ఎక్కువగా ఉంది.టెంప్లేట్ మొత్తాన్ని తగ్గించండి లేదా టెంప్లేట్‌ను విస్తరించిన తర్వాత 10 సార్లు పలుచన చేయండి;

3) పేలవమైన ప్రైమర్ విశిష్టత.ప్రైమర్ డిజైన్‌ను ఆప్టిమైజ్ చేయండి.

గమనికలు

1.నమూనాల మధ్య క్రాస్ కాలుష్యాన్ని నివారించడానికి, బహుళ నమూనా సాధనాలను సిద్ధం చేయాలి మరియు పునరావృత ఉపయోగం అవసరమైతే ప్రతి నమూనా తర్వాత 2% సోడియం హైపోక్లోరైట్ ద్రావణం లేదా న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ క్లీనర్‌తో సాధనాల ఉపరితలం శుభ్రం చేయవచ్చు.

2.తాజా మౌస్ కణజాలాలను ఉపయోగించమని సిఫార్సు చేయబడింది మరియు యాంప్లిఫికేషన్ ఫలితాలను ప్రభావితం చేయకుండా ఉండేందుకు నమూనా వాల్యూమ్ చాలా పెద్దదిగా ఉండకూడదు.

3.లైసిస్ బఫర్ తరచుగా ఫ్రీజ్-థావ్‌ను నివారించాలి మరియు స్వల్పకాలిక బహుళ ఉపయోగం కోసం 2~8℃ వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు.తక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిల్వ చేయబడితే, అవపాతం సంభవించవచ్చు మరియు ఉపయోగం ముందు పూర్తిగా కరిగిపోవాలి.

4.PCR మిక్స్ తరచుగా ఫ్రీజ్-కరగకుండా ఉండాలి మరియు స్వల్పకాలిక పునరావృత ఉపయోగం కోసం 4℃ వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు.

5.ఈ ఉత్పత్తి శాస్త్రీయ ప్రయోగాత్మక పరిశోధన కోసం మాత్రమే మరియు క్లినికల్ డయాగ్నసిస్ లేదా చికిత్సలో ఉపయోగించరాదు.