RT-LAMP ఫ్లోరెన్సెంట్ మాస్టర్ మిక్స్
ఈ ఉత్పత్తిలో రియాక్షన్ బఫర్, RT-ఎంజైమ్స్ మిక్స్ (Bst DNA పాలిమరేస్ మరియు హీట్-రెసిస్టెంట్ రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్టేజ్), లైయోఫైలైజ్డ్ ప్రొటెక్టెంట్స్ మరియుఫ్లోరోసెంట్రంగు భాగాలు.ప్రతిచర్య బఫర్ Mg2+, dNTP మరియు విస్తరణకు అవసరమైన ఇతర భాగాలను కలిగి ఉంది.ఉపయోగించడానికి, బఫర్, రియాక్షన్ ఎంజైమ్, ఫ్లోరోసెంట్ డై, ప్రైమర్లను కలపండి మరియు టెంప్లేట్ను జోడించండి, లైయోఫైలైజ్డ్ ప్రొటెక్టెంట్ని జోడించడం ద్వారా నేరుగా ఉపయోగించవచ్చు.ఇది లైయోఫైలైజర్కి కనెక్ట్ చేయబడింది మరియు లైయోఫైలైజ్ చేయబడింది మరియు ఉపయోగించినప్పుడు ప్రైమర్లు మరియు టెంప్లేట్లు మాత్రమే జోడించబడ్డాయి.ఈ రియాజెంట్ అధిక యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం మరియు సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది.
భాగం
| భాగం | HCB5205A-01 | HCB5205A-02 | HCB5205A-03 |
| లూప్-మెడియేటెడ్ యాంప్లిఫికేషన్ బఫర్ | 1.2 మి.లీ | 4 mL×3 | 12 mL×10 |
| RT-ఎంజైమ్ల మిశ్రమం | 245 μL | 2.45 మి.లీ | 2.45 mL×10 |
| లైయోఫిలైజ్డ్ ప్రొటెక్టెంట్ | 0.96 mL×2 | 9.60 mL×2 | 9.60 mL×20 |
| 25× రంగు | 192 μL | 0.96 mL×2 | 0.96 mL×20 |
అప్లికేషన్లు
DNA లేదా RNA ఐసోథర్మల్ యాంప్లిఫికేషన్ కోసం.
నిల్వ పరిస్థితులు
డ్రై ఐస్తో రవాణా చేయబడుతుంది, -25~ -15℃ వద్ద నిల్వ చేయబడుతుంది.తరచుగా ఫ్రీజ్-కరగడాన్ని నివారించండి, ఉత్పత్తి 12 నెలల వరకు చెల్లుబాటు అవుతుంది.
ప్రోటోకాల్
1.గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉపయోగించాల్సిన ప్రతిచర్య బఫర్ను కరిగించండి.పూర్తిగా కలపడానికి క్లుప్తంగా వోర్టెక్స్ చేయండి లేదా ట్యూబ్లను చాలా సార్లు విలోమం చేయండి, ఆపై ట్యూబ్ దిగువన ద్రవాన్ని సేకరించడానికి సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి.
2.ప్రతిచర్య వ్యవస్థ తయారీ.ఈ రియాజెంట్ను రెండు రియాక్షన్ సిస్టమ్లలో తయారు చేయవచ్చు, లిక్విడ్ రియాక్షన్ మిక్స్ మరియు లైయోఫైలైజ్డ్ సిస్టమ్ మిక్స్.
1) ద్రవ ప్రతిచర్య మిశ్రమాన్ని సిద్ధం చేయండి
| భాగం | వాల్యూమ్ |
| లూప్-మెడియేటెడ్ యాంప్లిఫికేషన్ బఫర్ | 12.5 μL |
| 25× రంగు | 2 μL |
| RT-ఎంజైమ్ల మిశ్రమం | 2.55 μL |
| 10 × ప్రైమర్ మిక్స్a | 5 μL |
| DNA/RNA టెంప్లేట్లు b | × μL |
| న్యూక్లీజ్ లేని నీరు | 50 μL వరకు |
2) లైయోఫిలైజేషన్ సిస్టమ్ మిక్స్
① లైయోఫైలైజ్డ్ మిక్స్ను సిద్ధం చేయండి
| భాగం | వాల్యూమ్ |
| లూప్-మెడియేటెడ్ యాంప్లిఫికేషన్ బఫర్ | 12.5 μL |
| లైయోఫిలైజ్డ్ ప్రొటెక్టెంట్ | 20 μL |
| 25× రంగు | 2 μL |
| RT-ఎంజైమ్ల మిశ్రమం | 2.55 μL |
| న్యూక్లీజ్ లేని నీరు | 50 μL వరకు |
② లియోఫిలైజేషన్: సిద్ధం చేసిన మిక్స్ 50μL సిస్టమ్లో లైయోఫైలైజ్ చేయబడింది
③ ప్రతిచర్య మిశ్రమాన్ని సిద్ధం చేయండి
| భాగం | వాల్యూమ్ |
| లియోఫిలైజ్డ్ మిక్స్ | 1 ముక్క |
| 10 × ప్రైమర్ మిక్స్a | 5 μL |
| DNA/RNA టెంప్లేట్లు b | × μL |
| న్యూక్లీజ్ లేని నీరు | 50 μL వరకు |
గమనికలు:
1) a.10×ప్రైమర్ మిక్స్ : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM లూప్ F/B;
2) బి.న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ టెంప్ల్ కోసం DEPC (నీటిలో కరిగేది) సిఫార్సు చేయబడింది.
3)యాంప్లిఫికేషన్ రియాక్షన్: ఫ్లోరోసెంట్ PCR పరికరంలో కింది ప్రోగ్రామ్ను సెటప్ చేయండి (ఉదా. ABI7500, మొదలైనవి):
| ఉష్ణోగ్రత | సమయం | సర్కిల్లు |
| 65 ℃ | 60 సెకన్లు *FAM ఫ్లోరోసెన్స్ని సేకరించండి | 30 |
గమనికలు
1.బఫర్ ట్యూబ్ దిగువన ఉప్పు కనిపించవచ్చు, క్లుప్తంగా సుడిగుండం లేదా గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద పూర్తిగా కలపడానికి ట్యూబ్లను చాలాసార్లు విలోమం చేయవచ్చు.
2.ప్రైమర్ల పరిస్థితిని బట్టి ప్రతిచర్య ఉష్ణోగ్రతను 62 ℃ మరియు 68 ℃ మధ్య ఆప్టిమైజ్ చేయవచ్చు.
3.ప్రతిచర్య వ్యవస్థ తయారీ, లైఫిలైజేషన్ మరియు నమూనా ప్రాసెసింగ్ మరియు నమూనా జోడించే ప్రక్రియతో సహా ప్రయోగం ప్రామాణికంగా ఉండాలి;
4.కాలుష్యాన్ని నివారించడానికి, తప్పుడు సానుకూల జోక్యాన్ని నివారించడానికి గది యొక్క ఫ్యూమ్ హుడ్కు ఇతర టెంప్లేట్లను జోడించడానికి అల్ట్రా-క్లీన్ బెంచ్లో ప్రతిచర్య వ్యవస్థను సిద్ధం చేయాలని సిఫార్సు చేయబడింది.
