BsaI
BsaI, IIs పరిమితి ఎండోన్యూకలీస్ పరిమితి ఎండోన్యూకలీస్, బాసిల్లస్ స్టెరోథెర్మోఫిలస్ నుండి క్లోన్ చేయబడిన మరియు సవరించబడిన BsaI జన్యువును తీసుకువెళ్ళే సమ్మిళిత E. coli జాతి నుండి తీసుకోబడింది. ఇది స్థానిక ఎంజైమ్ మరియు తగ్గిన స్టార్ యాక్టివిటీకి సమానమైన ప్రత్యేకతను కలిగి ఉంటుంది.దీని గుర్తింపు క్రమం మరియు క్లీవేజ్ సైట్లు క్రింది విధంగా ఉన్నాయి:
5'······GGTCTC(N)·············3'
3'······CCAGAG(NNNNN)···5'
భాగాలు
BsaI(20U/μL), 10xBsaI బఫర్
నిల్వ
-25℃~-15℃ వద్ద నిల్వ చేయండి, 1 సంవత్సరం వరకు చెల్లుబాటు అవుతుంది (రిపీట్ ఫ్రీజ్-థా సైకిల్స్ను నివారించండి).
నిల్వ బఫర్
10mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM DTT 0.1mM EDTA, 200µg/ml రీకాంబినెంట్ అల్బుమిన్, 50% గ్లిసరాల్.(pH 7.4 @ 25°C).
ఉత్పత్తి లక్షణాలు
అధిక కార్యాచరణ, వేగవంతమైన జీర్ణక్రియ;
1. తక్కువ స్టార్ యాక్టివిటీ, "స్కాల్పెల్" వంటి ఖచ్చితమైన కట్టింగ్ను నిర్ధారిస్తుంది;
2. BSA లేకుండా మరియు జంతు మూలం ఉచితం.
మిథైలేషన్ సెన్సిటివిటీ
డ్యామ్ మిథైలేషన్: సెన్సిటివ్ కాదు;
Dcm మిథైలేషన్: అతివ్యాప్తి యొక్క కొన్ని కలయికల ద్వారా బలహీనపడింది;
CpG మిథైలేషన్: అతివ్యాప్తి యొక్క కొన్ని కలయికలచే నిరోధించబడింది.
యూనిట్ నిర్వచనం
50 µL మొత్తం ప్రతిచర్య పరిమాణంలో 1 గంటలో 37 ° C వద్ద 1 µg అంతర్గత నియంత్రణ DNA ను జీర్ణం చేయడానికి అవసరమైన ఎంజైమ్ మొత్తం నిర్వచించబడింది.
నాణ్యత నియంత్రణ
ప్రోటీన్ స్వచ్ఛత పరీక్ష (SDS-PAGE): Coomassie బ్లూ డిటెక్షన్ని ఉపయోగించి SDS-PAGE విశ్లేషణ ద్వారా Bsa I యొక్క స్వచ్ఛత ≥ 95% నిర్ణయించబడింది.
RNase:16గంటలకు 1.6 μg MS2 RNAతో Bsa I యొక్క 20 U
నాన్-స్పెసిఫిక్ DNase యాక్టివిటీ:20 Uof BsaI 1 μg PhiX174 DNAతో 37 ℃ వద్ద 16 గంటల పాటు అగరోజ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా నిర్ణయించబడిన అదనపు DNAని అందించదు.
లిగేషన్ మరియు రీకటింగ్:1 μg జీర్ణం అయిన తర్వాత
E.coli DNA:2Uof VacciniavirusCapping ఎంజైమ్ E. coli 16S rRNA లోకస్ కోసం ప్రత్యేకమైన ప్రైమర్లతో TaqManqPCR ఉపయోగించి E. కోలి జెనోమిక్ DNA ఉనికి కోసం పరీక్షించబడింది.E. కోలి జన్యుసంబంధమైన DNA కాలుష్యం ≤1 E. కోలి జన్యువు.
బాక్టీరియల్ ఎండోటాక్సిన్:LAL-పరీక్ష, చైనీస్ ఫార్మకోపోయియాIV2020ఎడిషన్ ప్రకారం, జెల్ పరిమితి పరీక్ష పద్ధతి, సాధారణ నియమం (1143).బాక్టీరియల్ ఎండోటాక్సిన్ కంటెంట్ ≤10 EU/mg ఉండాలి.
ప్రతిచర్య వ్యవస్థ మరియు పరిస్థితులు
| భాగం | వాల్యూమ్ |
| BsaI (20 U/μL) | 1μL |
| DNA | 1μg |
| 10 x BsaI బఫర్ | 5μL |
| dd H2O | 50 μL వరకు |
15-30 నిమిషాలు 37 ° C వద్ద పొదిగే.వేడి నిష్క్రియం: 20 నిమిషాలకు 80°C.
సిఫార్సు చేయబడిన ప్రతిచర్య వ్యవస్థ మరియు పరిస్థితులు సాపేక్షంగా మంచి ఎంజైమ్ జీర్ణక్రియ ప్రభావాన్ని అందించగలవు, ఇది సూచన కోసం మాత్రమే, దయచేసి వివరాల కోసం ప్రయోగాత్మక ఫలితాలను చూడండి.
అప్లికేషన్లు
పరిమితి ఎంజైమ్ జీర్ణక్రియ వేగంగా క్లోనింగ్.
ఉపయోగంపై గమనికలు
1.ఎంజైమ్ వాల్యూమ్ ≤ 1/10 ప్రతిచర్య వాల్యూమ్.
2. స్టార్యాక్టివిటీ మయోక్యూర్హెంగ్లిసరాల్ ఏకాగ్రత 5% కంటే ఎక్కువ.
3. సిఫార్సు చేసిన నిష్పత్తి కంటే తక్కువ సబ్స్ట్రేట్ చేసినప్పుడు క్లీవేజ్ యాక్టివిటీ సంభవించవచ్చు.
