ప్రొటీనేస్ K NGS (పొడి)
పిల్లి సంఖ్య: HC4507A
NGS ప్రోటీజ్ K అనేది అధిక ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలు మరియు విస్తృత సబ్‌స్ట్రేట్ విశిష్టత కలిగిన స్థిరమైన సెరైన్ ప్రోటీజ్. ఈ ఎంజైమ్ హైడ్రోఫోబిక్ అమైనో ఆమ్లాలు, సల్ఫర్-కలిగిన అమైనో ఆమ్లాలు మరియు సుగంధ అమైనో ఆమ్లాల యొక్క C-టెర్మినల్‌కు ఆనుకుని ఉన్న ఈస్టర్ బంధాలు మరియు పెప్టైడ్ బంధాలను ప్రాధాన్యతగా విడదీస్తుంది.కాబట్టి, ప్రోటీన్లను చిన్న పెప్టైడ్‌లుగా మార్చడానికి ఇది తరచుగా ఉపయోగించబడుతుంది.NGS ప్రోటీజ్ K అనేది Aspతో కూడిన ఒక సాధారణ సెరైన్ ప్రోటీజ్39-తన69-సర్224ఉత్ప్రేరక త్రయం, ఇది సెరైన్ ప్రోటీజ్‌లకు ప్రత్యేకమైనది, మరియు ఉత్ప్రేరక కేంద్రం చుట్టూ టో Ca ఉంటుంది2+స్థిరీకరణ కోసం బైండింగ్ సైట్లు, విస్తృతమైన పరిస్థితులలో అధిక ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలను నిర్వహించడం.
స్పెసిఫికేషన్
| స్వరూపం | తెలుపు నుండి ఆఫ్-వైట్ నిరాకార పొడి, లైయోఫైలైజ్డ్ |
| నిర్దిష్ట కార్యాచరణ | ≥40U/mg ఘన |
| DNase | ఏదీ కనుగొనబడలేదు |
| RNase | ఏదీ కనుగొనబడలేదు |
| బయోబర్డెన్ | ≤50CFU/g ఘన |
| న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ అవశేషాలు | <5pg/mg ఘన |
లక్షణాలు
| మూలం | ట్రిటిరాచియం ఆల్బమ్ |
| EC నంబర్ | 3.4.21.64(ట్రిటిరాచియం ఆల్బమ్ నుండి రీకాంబినెంట్) |
| పరమాణు బరువు | 29kDa (SDS-PAGE) |
| ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్ | 7.81 Fig.1 |
| వాంఛనీయ pH | 7.0-12.0 (అందరూ అధిక కార్యాచరణను ప్రదర్శిస్తారు) Fig.2 |
| వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత | 65℃ Fig.3 |
| pH స్థిరత్వం | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Fig.4 |
| ఉష్ణ స్థిరత్వం | 50℃ క్రింద (pH 8.0, 30నిమి) Fig.5 |
| నిల్వ స్థిరత్వం | 25℃ వద్ద 12 నెలల పాటు నిల్వ చేయబడుతుంది Fig.6 |
| యాక్టివేటర్లు | SDS, యూరియా |
| నిరోధకాలు | డైసోప్రొపైల్ ఫ్లోరోఫాస్ఫేట్;బెంజైల్సల్ఫోనిల్ ఫ్లోరైడ్ |
నిల్వ పరిస్థితులు
లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్‌ను -25~-15 ℃ వద్ద చాలా కాలం పాటు కాంతికి దూరంగా ఉంచండి;కరిగిన తర్వాత, ఆల్కాట్‌ను 2-8℃ వద్ద స్వల్పకాలిక నిల్వ కోసం తగిన వాల్యూమ్‌లో కాంతికి దూరంగా లేదా దీర్ఘకాల నిల్వలో -25~-15 ℃ వద్ద కాంతికి దూరంగా ఉంచాలి.
ముందుజాగ్రత్తలు
ఉపయోగించినప్పుడు లేదా బరువుగా ఉన్నప్పుడు రక్షిత చేతి తొడుగులు మరియు గాగుల్స్ ధరించండి మరియు ఉపయోగించిన తర్వాత బాగా వెంటిలేషన్ చేయండి.ఈ ఉత్పత్తి చర్మానికి అలెర్జీ ప్రతిచర్య మరియు తీవ్రమైన కంటి చికాకు కలిగించవచ్చు.పీల్చినట్లయితే, అది అలెర్జీ లేదా ఆస్తమా లక్షణాలు లేదా డిస్ప్నియాకు కారణం కావచ్చు.శ్వాసకోశ చికాకు కలిగించవచ్చు.
యూనిట్ నిర్వచనం
NGS ప్రోటీజ్ K యొక్క ఒక యూనిట్ ప్రామాణిక నిర్ణయ పరిస్థితులలో 1 μmol L-టైరోసిన్‌గా కేసీన్‌ను హైడ్రోలైజ్ చేయడానికి అవసరమైన ఎంజైమ్ మొత్తంగా నిర్వచించబడింది.
కారకాల తయారీ
| కారకం | తయారీదారు | జాబితా |
| కేసిన్ టెక్నికల్బోవిన్ పాలు నుండి | సిగ్మా ఆల్డ్రిచ్ | C7078 |
| NaOH | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 10019762 |
| NaH2PO4·2H2O | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 20040718 |
| Na2HPO4 | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 20040618 |
| ట్రైక్లోరోఅసిటిక్ యాసిడ్ | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 80132618 |
| సోడియం అసిటేట్ | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 10018818 |
| ఎసిటిక్ ఆమ్లం | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 10000218 |
| HCl | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 10011018 |
| వాషింగ్ సోడా | సినోఫార్మ్ కెమికల్రీజెంట్ కో., లిమిటెడ్ | 10019260 |
| ఫోలిన్-ఫినాల్ | సంగోన్ బయోటెక్ (షాంఘై)కో., లిమిటెడ్ | A500467-0100 |
| ఎల్-టైరోసిన్ | సిగ్మా | 93829 |
కారకం I:
సబ్‌స్ట్రేట్: బోవిన్ మిల్క్ ద్రావణం నుండి 1% కేసిన్: 1గ్రా బోవిన్ మిల్క్ కేసైన్‌ను 50ml 0.1M సోడియం ఫాస్ఫేట్ ద్రావణంలో కరిగించండి, pH 8.0, నీటి స్నానంలో 65-70 °C వద్ద 15 నిమిషాలు వేడి చేసి, కదిలించు మరియు కరిగించి, నీటితో చల్లబరుస్తుంది, సర్దుబాటు చేయండి సోడియం హైడ్రాక్సైడ్ pH 8.0కి, మరియు 100ml వరకు పలుచన చేయండి.
రీజెంట్ II:
TCA ద్రావణం: 0.1M ట్రైక్లోరోఅసిటిక్ యాసిడ్, 0.2M సోడియం అసిటేట్ మరియు 0.3M ఎసిటిక్ యాసిడ్ (బరువు 1.64g ట్రైక్లోరోఅసిటిక్ యాసిడ్ + 1.64g సోడియం అసిటేట్ + 1.724mL ఎసిటిక్ యాసిడ్ వరుసగా, 50mL డీయోనైజ్డ్ వాటర్‌కి, హెచ్‌4 Cl డీయోనైజ్డ్ వాటర్‌లో 50mL జోడించండి 100ml).
రీజెంట్ III:
0.4m సోడియం కార్బోనేట్ ద్రావణం (4.24g అన్‌హైడ్రస్ సోడియం కార్బోనేట్ బరువు మరియు 100mL నీటిలో కరిగించండి)
రీజెంట్ IV:
ఫోలిన్ ఫినాల్ రియాజెంట్: డీయోనైజ్డ్ నీటితో 5 సార్లు కరిగించండి.
రియాజెంట్ V:
ఎంజైమ్ పలచన: 0.1 M సోడియం ఫాస్ఫేట్ ద్రావణం, pH 8.0.
రీజెంట్ VI:
L-టైరోసిన్ ప్రామాణిక పరిష్కారం:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-టైరోసిన్ 0.2M HClతో కరిగించబడుతుంది.
విధానము
1. UV-Vis స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌ను ఆన్ చేసి, ఫోటోమెట్రిక్ కొలతను ఎంచుకోండి.
2. తరంగదైర్ఘ్యాన్ని 660nmగా సెట్ చేయండి.
3. వాటర్ బాత్‌ను ఆన్ చేసి, ఉష్ణోగ్రతను 37℃కి సెట్ చేయండి, 3-5నిమిషాల వరకు ఉష్ణోగ్రత మారకుండా ఉండేలా చూసుకోండి.
4. 0.5mL సబ్‌స్ట్రేట్‌ను 2mL సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లో 37℃ వాటర్ బాత్ వద్ద 10నిమిషాల పాటు ముందుగా వేడి చేయండి.
5. 10 నిమిషాలు ముందుగా వేడిచేసిన సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లోకి 0.5mL పలచబరిచిన ఎంజైమ్ ద్రావణాన్ని సంగ్రహించండి.ఎంజైమ్ పలచనను ఖాళీ సమూహంగా సెట్ చేయండి.
6. ప్రతిచర్య తర్వాత వెంటనే 1.0 mL TCA రియాజెంట్ జోడించండి.బాగా కలపండి మరియు నీటి స్నానంలో 30 నిమిషాలు పొదిగించండి.
7. సెంట్రిఫ్యూగేట్ ప్రతిచర్య పరిష్కారం.
8. పేర్కొన్న క్రమంలో కింది భాగాలను జోడించండి.
| కారకం | వాల్యూమ్ |
| సూపర్నాటెంట్ | 0.5 మి.లీ |
| 0.4M సోడియం కార్బోనేట్ | 2.5 మి.లీ |
| ఫోలిన్ ఫినాల్ రియాజెంట్ | 0.5 మి.లీ |
9. నీటి స్నానంలో 37 ℃ 30 నిమిషాల పాటు పొదిగే ముందు బాగా కలపండి.
10. OD660OD గా నిర్ణయించబడింది1;ఖాళీ నియంత్రణ సమూహం: OD ని నిర్ణయించడానికి ఎంజైమ్ ద్రావణాన్ని భర్తీ చేయడానికి ఎంజైమ్ డైలెంట్ ఉపయోగించబడుతుంది660OD గా2, ΔOD=OD1-OD2.
11. L-టైరోసిన్ స్టాండర్డ్ కర్వ్: 0.5mL డిఫరెంట్ గాఢత L-టైరోసిన్ ద్రావణం, 2.5mL 0.4M సోడియం కార్బోనేట్, 5mL సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లో 0.5mL ఫోలిన్ ఫినాల్ రియాజెంట్, 30 నిమిషాల పాటు 37℃లో పొదిగేది, OD కోసం గుర్తించండి660L-టైరోసిన్ యొక్క విభిన్న సాంద్రత కోసం, అప్పుడు ప్రామాణిక వక్రరేఖ Y=kX+b పొందబడింది, ఇక్కడ Y అనేది L-టైరోసిన్ గాఢత, X అనేది OD600.
లెక్కింపు
2: ప్రతిచర్య పరిష్కారం యొక్క మొత్తం వాల్యూమ్ (mL)
0.5: ఎంజైమ్ ద్రావణం యొక్క వాల్యూమ్ (mL)
0.5: క్రోమోజెనిక్ డిటర్మినేషన్ (mL)లో ఉపయోగించే ప్రతిచర్య ద్రవ పరిమాణం
10: ప్రతిచర్య సమయం (నిమి)
Df: పలుచన బహుళ
C: ఎంజైమ్ గాఢత (mg/mL)
బొమ్మలు
Fig.1 DNA అవశేషాలు
| నమూనా | ఏవ్ C4 | న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ రికవరీ (pg/mg) | రికవరీ(%) | మొత్తం న్యూక్లియిక్ ఆమ్లము ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-రహిత H2O | నిశ్చయించబడలేదు | - | - | - |
Fig.2 ఆప్టిమమ్ pH
Fig.3 వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత
Fig.4 pH స్థిరత్వం
Fig.5 ఉష్ణ స్థిరత్వం
Fig.6 25℃ వద్ద నిల్వ స్థిరత్వం
