Rnase నిరోధకం
మురిన్ RNase ఇన్హిబిటర్ అనేది రీకాంబినెంట్ మురైన్ RNase ఇన్హిబిటర్, ఇది E.coli నుండి వ్యక్తీకరించబడింది మరియు శుద్ధి చేయబడుతుంది.ఇది సమయోజనీయ బంధం ద్వారా 1:1 నిష్పత్తిలో RNase A, B లేదా Cతో బంధిస్తుంది, తద్వారా మూడు ఎంజైమ్‌ల కార్యకలాపాలను నిరోధిస్తుంది మరియు RNA క్షీణత నుండి రక్షిస్తుంది.అయినప్పటికీ, ఇది ఆస్పర్‌గిల్లస్ నుండి RNase 1, RNase T1, S1 న్యూక్లీస్, RNase H లేదా RNaseకి వ్యతిరేకంగా ప్రభావవంతంగా ఉండదు.మురిన్ RNase నిరోధకం RT-PCR, RT-qPCR మరియు IVT mRNA ద్వారా పరీక్షించబడింది మరియు వివిధ వాణిజ్య రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌లు, DNA పాలిమరేసెస్ మరియు RNA పాలిమరేసెస్‌లకు అనుకూలంగా ఉంది.
మానవ RNase నిరోధకాలతో పోలిస్తే, మురైన్ RNase ఇన్హిబిటర్ రెండు సిస్టీన్‌లను కలిగి ఉండదు, ఇవి ఆక్సీకరణకు అధిక సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటాయి, ఇది నిరోధకాన్ని నిష్క్రియం చేస్తుంది.ఇది తక్కువ DTT (1 mM కంటే తక్కువ) సాంద్రతలలో స్థిరంగా ఉంటుంది.DTT యొక్క అధిక సాంద్రతలు ప్రతిచర్యకు ప్రతికూలంగా ఉన్న ప్రతిచర్యలలో (ఉదా రియల్-టైమ్ RT-PCR) ఉపయోగించడానికి ఈ ఫీచర్ దీన్ని అనుకూలంగా చేస్తుంది.
Aఅప్లికేషన్
RNA క్షీణతను నివారించడానికి RNase జోక్యం సాధ్యమయ్యే ఏదైనా ప్రయోగంలో ఈ ఉత్పత్తిని విస్తృతంగా ఉపయోగించవచ్చు, అవి:
1.cDNA, RT-PCR, RT-qPCR మొదలైన వాటి యొక్క మొదటి స్ట్రాండ్ యొక్క సంశ్లేషణ.
2.ఇన్ విట్రో ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్/అనువాదం (ఉదా, ఇన్ విట్రో వైరల్ రెప్లికేషన్ సిస్టమ్) సమయంలో అధోకరణం నుండి RNA రక్షిస్తుంది.
3.RNA వేరు మరియు శుద్దీకరణ సమయంలో RNase కార్యకలాపాల నిరోధం.
నిల్వ పరిస్థితులు
ఉత్పత్తిని -25～- 15 ℃ వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు, ఇది 2 సంవత్సరాలు చెల్లుతుంది.
నిల్వ బఫర్
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT మరియు 50% గ్లిసరాల్.
యూనిట్ నిర్వచనం
5ng రిబోన్యూక్లీస్ A యొక్క కార్యాచరణను 50% నిరోధించడానికి అవసరమైన మురైన్ RNase ఇన్హిబిటర్ మొత్తం ఒక యూనిట్ (U)గా నిర్వచించబడింది.
ప్రోటీన్ యొక్క పరమాణు బరువు
మురైన్ RNase ఇన్హిబిటర్ యొక్క పరమాణు బరువు 50 kDa.
నాణ్యత నియంత్రణ
ఎక్సోన్యూకలీస్ కార్యాచరణ:
16 గంటల పాటు 37℃ వద్ద 1 μg λ -హిండ్ III డైజెస్ట్ DNAతో 40 U మురిన్ RNase ఇన్హిబిటర్ అగరోస్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా నిర్ణయించిన విధంగా ఎటువంటి క్షీణతను అందించదు.
ఎండోన్యూక్లీస్ కార్యాచరణ:
16 గంటల పాటు 37℃ వద్ద 1μg λ DNAతో 40 U మురిన్ RNase ఇన్హిబిటర్ అగరోస్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా నిర్ణయించబడిన క్షీణతను అందించదు.
నిక్కింగ్ కార్యాచరణ:
40U మురిన్ RNase ఇన్హిబిటర్ 1μg pBR322తో 37℃ వద్ద 16 గంటల పాటు అగరోజ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా నిర్ణయించిన విధంగా ఎటువంటి క్షీణతను అందించదు.
RNase కార్యాచరణ:
40U మురిన్ RNase ఇన్హిబిటర్ 1.6μg MS2 RNAతో 4h కోసం 37℃ వద్ద అగరోజ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ నిర్ణయించినట్లుగా ఎటువంటి క్షీణతను అందించదు.
E.కోలి DNA:
E. coli 16S rRNA లోకస్ కోసం ప్రత్యేకమైన ప్రైమర్‌లతో TaqMan qPCR ఉపయోగించి E. కోలి జెనోమిక్ DNA ఉనికి కోసం 40 U మురిన్ RNase ఇన్హిబిటర్ పరీక్షించబడింది.E. కోలి జన్యుసంబంధమైన DNA కాలుష్యం ≤ 0.1 pg/40 U.
Nఓటేs
1.హింసాత్మక డోలనం లేదా కదిలించడం ఎంజైమ్ నిష్క్రియాత్మకతకు దారి తీస్తుంది.
2.ఈ నిరోధకం యొక్క వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత పరిధి 25-55 ℃, మరియు ఇది 65℃ మరియు అంతకంటే ఎక్కువ వద్ద నిష్క్రియం చేయబడింది.
3. RNase H, RNase 1 మరియు RNase T1 యొక్క కార్యకలాపాలు మురిన్ RNase ఇన్హిబిటర్ ద్వారా నిరోధించబడలేదు.
4. RNase కార్యాచరణ యొక్క నిరోధం pH యొక్క విస్తృత శ్రేణిలో కనుగొనబడింది (pH 5-9 అన్నీ చురుకుగా ఉన్నాయి), మరియు అత్యధిక కార్యాచరణ pH 7-8 వద్ద గమనించబడింది.
5.రిబోన్యూక్లీస్‌లు సాధారణంగా డీనాటరింగ్ పరిస్థితులలో కార్యాచరణను కలిగి ఉంటాయి కాబట్టి, రిబోన్యూక్లీస్‌తో సంక్లిష్టంగా ఉన్న RNase ఇన్హిబిటర్ అణువులను డీనాట్ చేయడాన్ని నివారించడానికి జాగ్రత్తలు తీసుకోవాలి.క్రియాశీల రిబోన్యూక్లీస్ విడుదలను నిరోధించడానికి, 50 °C కంటే ఎక్కువ ఉష్ణోగ్రతలు మరియు యూరియా లేదా ఇతర డీనాటరింగ్ ఏజెంట్ల అధిక సాంద్రతలను నివారించాలి.
