M-MLV నియోస్క్రిప్ట్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్

నియోస్క్రిప్ట్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ అనేది మోలోనీ మురిన్ లుకేమియా వైరస్ మూలం మరియు E.coliలోని వ్యక్తీకరణ యొక్క M-MLV జన్యువు యొక్క మ్యుటేషన్ స్క్రీనింగ్ ద్వారా పొందిన రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్.ఎంజైమ్ RNase H కార్యాచరణను తొలగిస్తుంది, అధిక ఉష్ణోగ్రత సహనాన్ని కలిగి ఉంటుంది మరియు అధిక-ఉష్ణోగ్రత రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్‌కు అనుకూలంగా ఉంటుంది.అందువల్ల, cDNA సంశ్లేషణపై RNA ఉన్నత-స్థాయి నిర్మాణం మరియు నిర్దిష్ట-కాని కారకాల యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాలను తొలగించడానికి ఇది సహాయపడుతుంది మరియు అధిక స్థిరత్వం మరియు రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ సంశ్లేషణ సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉంటుంది.ఎంజైమ్ అధిక స్థిరత్వం మరియు రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ సంశ్లేషణ సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉంటుంది.

భాగాలు

1.200 U/μL నియోస్క్రిప్ట్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్

2.5 × ఫస్ట్-స్ట్రాండ్ బఫర్ (ఐచ్ఛికం)

* 5 × ఫస్ట్-స్ట్రాండ్ బఫర్‌లో dNTP లేదు, దయచేసి రియాక్షన్ సిస్టమ్‌ను సిద్ధం చేస్తున్నప్పుడు dNTPలను జోడించండి

సిఫార్సు చేసిన అప్లికేషన్

1.ఒక-దశ qRT-PCR.

2.RNA వైరస్ గుర్తింపు.

నిల్వ పరిస్థితి

దీర్ఘకాలిక నిల్వ కోసం -20°C, ఉపయోగం ముందు బాగా కలపాలి, తరచుగా ఫ్రీజ్-కరిగించడం నివారించండి.

యూనిట్ నిర్వచనం

ఒక యూనిట్ పాలీ(A)•ఒలిగో(dT)ని ఉపయోగించి 37°C వద్ద 10 నిమిషాలలో 1 nmol dTTPని పొందుపరుస్తుంది₂₅టెంప్లేట్/ప్రైమర్‌గా.

నాణ్యత నియంత్రణ

1.SDS-PAGE ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ స్వచ్ఛత 98% కంటే ఎక్కువ.

2.యాంప్లిఫికేషన్ సెన్సిటివిటీ, బ్యాచ్-టు-బ్యాచ్ నియంత్రణ, స్థిరత్వం.

3.ఎక్సోజనస్ న్యూక్లీస్ యాక్టివిటీ లేదు, ఎక్సోజనస్ ఎండోన్యూకలీస్ లేదా ఎక్సోన్యూకలీస్ కాలుష్యం లేదు

మొదటి చైన్ రియాక్షన్ సొల్యూషన్ కోసం రియాక్షన్ సెటప్

1.ప్రతిచర్య మిశ్రమం యొక్క తయారీ

గమనికలు:a/b: దయచేసి మీ ప్రయోగాత్మక అవసరాలకు అనుగుణంగా వివిధ రకాల ప్రైమర్‌లను ఎంచుకోండి.

2.65°C వద్ద 5నిమిషాల పాటు వేడి చేసి, 2నిమిషాల పాటు మంచు మీద వేగంగా చల్లబరచండి.

3.పై సిస్టమ్‌కు కింది భాగాలను మొత్తం 20µL వాల్యూమ్‌కు జోడించి, సున్నితంగా కలపండి:

4.దయచేసి కింది షరతుల ప్రకారం ప్రతిచర్యను నిర్వహించండి:

(1) రాండమ్ ప్రైమర్ ఉపయోగించినట్లయితే, ప్రతిచర్యను 25℃ వద్ద 10నిమిషాలకు, ఆపై 50℃ వద్ద 30~60నిమిషాలకు నిర్వహించాలి;

(2) Oligo dT లేదా నిర్దిష్ట ప్రైమర్‌లను ఉపయోగించినట్లయితే, ప్రతిచర్యను 50℃ వద్ద 30~60నిమిషాల పాటు నిర్వహించాలి.

5.నియోస్క్రిప్ట్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌ని నిష్క్రియం చేయడానికి మరియు ప్రతిచర్యను ముగించడానికి 5 నిమిషాలు 95℃ వద్ద వేడి చేయండి.

6.రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ ఉత్పత్తులను నేరుగా PCR రియాక్షన్ మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ PCR రియాక్షన్‌లో ఉపయోగించవచ్చు లేదా -20℃ వద్ద ఎక్కువ కాలం నిల్వ ఉంచవచ్చు.

పిసిఆర్ ఆర్చర్య:

1.ప్రతిచర్య మిశ్రమం యొక్క తయారీ

గమనికలు:a: చాలా ఎక్కువ మొదటి చైన్ రియాక్షన్ సొల్యూషన్ జోడించబడితే, PCR ప్రతిచర్య నిరోధించబడవచ్చు.

2.PCR ప్రతిచర్య విధానం

గమనికలు

1.42℃~55℃ పరిధిలో రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ ఉష్ణోగ్రత ఆప్టిమైజేషన్‌కు అనుకూలం.

2.ఇది మెరుగైన స్థిరత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది, అధిక ఉష్ణోగ్రత రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ యాంప్లిఫికేషన్‌కు అనుకూలంగా ఉంటుంది.అదనంగా, RNA యొక్క సంక్లిష్ట నిర్మాణ ప్రాంతాల గుండా సమర్ధవంతంగా వెళ్లేందుకు ఇది అనుకూలమైనది.అలాగే, ఇదిఒక-దశ మల్టీప్లెక్స్ ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ RT-PCR డిటెక్షన్‌కు అనుకూలంగా ఉంటుంది.

3.వివిధ PCR యాంప్లిఫికేషన్ ఎంజైమ్‌లతో మంచి అనుకూలత మరియు అధిక సున్నితత్వ RT-PCR ప్రతిచర్యలకు అనుకూలంగా ఉంటుంది.

4.అధిక సున్నితత్వం వన్-స్టెప్ ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ RT-PCR ప్రతిచర్యకు అనుకూలం, టెంప్లేట్‌ల తక్కువ సాంద్రతను గుర్తించే రేటును సమర్థవంతంగా మెరుగుపరుస్తుంది.

5.cDNA లైబ్రరీ నిర్మాణానికి అనుకూలం.