UDG/UNG ఎంజైమ్లు
UDG(యురాసిల్ DNA గ్లైకోసైలేస్) ssDNA మరియు dsDNAలలో యురేసిల్ బేస్ మరియు షుగర్-ఫాస్ఫేట్ వెన్నెముక మధ్య N-గ్లైకోసిడిక్ లింక్ యొక్క జలవిశ్లేషణను ఉత్ప్రేరకపరుస్తుంది.ఇది ఏరోసోల్ కాలుష్యాన్ని సులభంగా నియంత్రించగలదు మరియు PCR, qPCR, RT-qPCR మరియు LAMP వంటి సాధారణ పరమాణు జీవశాస్త్ర వ్యవస్థలకు అనుకూలంగా ఉంటుంది.
స్పెసిఫికేషన్లు
వ్యక్తీకరణ హోస్ట్ | యురేసిల్ DNA గ్లైకోసైలేస్ జన్యువుతో రీకాంబినెంట్ E. కోలి |
పరమాణు బరువు | 24. 8kDa |
స్వచ్ఛత | ≥95% (SDS-PAGE) |
వేడి నిష్క్రియం | 95℃, 5~10 నిమి |
యూనిట్ నిర్వచనం | 25℃ వద్ద 30 నిమిషాలలో l μg dU-కలిగిన dsDNA యొక్క జలవిశ్లేషణను ఉత్ప్రేరకపరచడానికి అవసరమైన ఎంజైమ్ మొత్తంగా ఒక యూనిట్ (U) నిర్వచించబడింది. |
నిల్వ
ఉత్పత్తిని రెండు సంవత్సరాల పాటు -25℃~-15°C వద్ద నిల్వ చేయాలి.
సూచనలు
1.కింది సిస్టమ్ ప్రకారం PCR ప్రతిచర్య మిశ్రమం యొక్క తయారీ
భాగాలు | వాల్యూమ్ (μL) | చివరి ఏకాగ్రత |
10×PCR బఫర్ (Mg²+ప్లస్) | 5 | 1× |
25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/లీచ్) | 1 | 0.2 mmol/లీచ్ |
టెంప్లేట్ DNA | X | - |
ప్రైమర్1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
ప్రైమర్ 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
టాక్ DNA పాలిమరేస్ (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
యురేసిల్ DNA గ్లైకోసైలేస్ (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
ddH₂O | 50 వరకు | - |
గమనిక: ప్రయోగాత్మక అవసరాల ప్రకారం, dUTP యొక్క తుది సాంద్రతను 0.2-0.6 mmol/L మధ్య సర్దుబాటు చేయవచ్చు మరియు 0.2 mmol/L dTTPని ఎంపికగా జోడించవచ్చు.
2.యాంప్లిఫికేషన్ విధానం
సైకిల్ దశ | ఉష్ణోగ్రత | సమయం | సైకిళ్లు |
dU-కలిగిన టెంప్లేట్ క్షీణత | 25℃ | 10 నిమిషాలు | 1 |
UDG యాక్టివేషన్, టెంప్లేట్ ప్రారంభ డీనాటరేషన్ | 95℃ | 5~10 నిమిషాలు | 1 |
డీనాటరేషన్ | 95℃ | 10 సె |
30-35 |
ఎనియలింగ్ | 60℃ | 20 సె | |
పొడిగింపు | 72℃ | 30సెకన్/కెబి | |
చివరి పొడిగింపు | 72℃ | 5 నిమి | 1 |
గమనిక: ప్రయోగాత్మక అవసరాలకు అనుగుణంగా 25°C వద్ద ప్రతిచర్య సమయాన్ని 5-10 నిమిషాలలో సర్దుబాటు చేయవచ్చు.
గమనికలు
1.చాలా PCR ప్రతిచర్య బఫర్లలో UDG సక్రియంగా ఉంది.
2.ఎంజైమ్లను ఉపయోగించినప్పుడు ఐస్బాక్స్లో లేదా ఐస్ బాత్లో నిల్వ చేయాలి మరియు ఉపయోగించిన వెంటనే -20 ° C వద్ద నిల్వ చేయాలి.
3.దయచేసి మీ ఆరోగ్యం మరియు భద్రతను నిర్ధారించడానికి అవసరమైన PPE, అటువంటి ల్యాబ్ కోటు మరియు చేతి తొడుగులు ధరించండి!