యురేసిల్ DNA గ్లైకోసైలేస్
యురేసిల్-DNA గ్లైకోసైలేస్ (UNG లేదా UDG) అనేది 25 kDa పరమాణు బరువుతో E.coli యొక్క రీకాంబినెంట్ క్లోన్.ఇది యురేసిల్-కలిగిన సింగిల్-స్ట్రాండ్ మరియు డబుల్ స్ట్రాండెడ్ DNA నుండి ఉచిత యురేసిల్ విడుదలను ఉత్ప్రేరకపరుస్తుంది మరియు RNAకి వ్యతిరేకంగా క్రియారహితంగా ఉంటుంది మరియు PCR యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తుల కలుషితాన్ని నిరోధించడానికి ఉపయోగించవచ్చు.PCR ప్రతిచర్యలో dTTPకి dUTP ప్రత్యామ్నాయంగా ఉంటే మరియు dU బేస్‌లను కలిగి ఉన్న PCR యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తి ఏర్పడినట్లయితే, ఎంజైమ్ U బేస్‌ల యొక్క గ్లైకోసిడిక్ బంధాన్ని సింగిల్ స్ట్రాండెడ్ మరియు డబుల్ స్ట్రాండెడ్‌లో ఎంపిక చేసి విచ్ఛిన్నం చేయగలదనే వాస్తవంపై చర్య యొక్క సూత్రం ఆధారపడి ఉంటుంది. DNA మరియు PCR యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తిని అధోకరణం చేస్తుంది.
సిఫార్సు చేసిన అప్లికేషన్
కాలుష్య నివారణ విస్తరణ
నిల్వ పరిస్థితి
దీర్ఘకాలిక నిల్వ కోసం -20°C, ఉపయోగం ముందు బాగా కలపాలి, తరచుగా ఫ్రీజ్-కరిగించడం నివారించండి.
నిల్వ బఫర్
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, స్టెబిలైజర్, 50% గ్లిసరాల్.
యూనిట్ నిర్వచనం
37°C వద్ద 1 గంటలో dU బేస్‌లను కలిగి ఉన్న 1µg సింగిల్ స్ట్రాండెడ్ DNAను అధోకరణం చేయడానికి అవసరమైన ఎంజైమ్ మొత్తం 1 యూనిట్.
నాణ్యత నియంత్రణ
1.SDS-PAGE ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ స్వచ్ఛత 98% కంటే ఎక్కువ
2.యాంప్లిఫికేషన్ సెన్సిటివిటీ, బ్యాచ్-టు-బ్యాచ్ నియంత్రణ, స్థిరత్వం
3.1U UNG 50℃ వద్ద 2 నిమిషాల పాటు చికిత్స చేసిన తర్వాత, 103 కాపీల కంటే తక్కువ U ఉన్న టెంప్లేట్ పూర్తిగా క్షీణించబడాలి మరియు ఏ యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తిని ఉత్పత్తి చేయకూడదు.
4.ఎక్సోజనస్ న్యూక్లీస్ యాక్టివిటీ లేదు
సూచనలు
| భాగాలు | వాల్యూమ్ (μL) | చివరి ఏకాగ్రత |
| 10 × PCR బఫర్ (dNTP ఉచితం, Mg²+ఉచిత) | 5 | 1× |
| dUTPలు (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP స్థానంలో) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 మి.మీ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × ప్రైమర్ మిక్స్a | 2 | 1× |
| మూస | - | 1μg/ప్రతిచర్య |
| ddH₂O | 50 వరకు | - |
గమనిక: a: qPCR/qRT-PCR కోసం ఉపయోగించినట్లయితే, ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోబ్‌ను రియాక్షన్ సిస్టమ్‌లో చేర్చాలి.సాధారణంగా, 0.2 μM యొక్క తుది ప్రైమర్ ఏకాగ్రత మంచి ఫలితాలను ఇస్తుంది;ప్రతిచర్య పనితీరు తక్కువగా ఉన్నప్పుడు, ప్రైమర్ ఏకాగ్రతను 0.2-1 μM పరిధిలో సర్దుబాటు చేయవచ్చు.సాధారణంగా, ప్రోబ్ ఏకాగ్రత 0.1-0.3 μM పరిధిలో ఆప్టిమైజ్ చేయబడుతుంది.ప్రైమర్ మరియు ప్రోబ్ యొక్క ఉత్తమ కలయికను కనుగొనడానికి ఏకాగ్రత ప్రవణత ప్రయోగాలు చేయవచ్చు.
గమనికలు
1.PCR యాంప్లిఫికేషన్ రియాక్షన్‌కి ముందు రియాక్షన్ సిస్టమ్ నుండి కలుషితమైన dUTP యాంప్లిఫికేషన్ ఉత్పత్తులను తొలగించడానికి, ఆపై ఉత్పత్తి కాలుష్యం కారణంగా తప్పుడు-సానుకూల ఫలితాలను నివారించడానికి UNG ఎంజైమ్‌ను ఉపయోగించవచ్చు.
2.యాంటీ-కాలుష్య PCR ప్రతిచర్యలో UNG ఎంజైమ్‌ని ఉపయోగించడానికి సరైన ఉష్ణోగ్రత సాధారణంగా 2 నిమిషాలకు 50℃;నిష్క్రియ స్థితి 5 నిమిషాలకు 95℃.
3.తరచుగా ఫ్రీజ్-కరగడాన్ని నివారించండి మరియు పెద్ద ఉష్ణోగ్రత హెచ్చుతగ్గులకు గురికావద్దు.
4.విస్తరించాల్సిన వివిధ జన్యువులు dUTP యొక్క విభిన్న వినియోగ సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉంటాయి మరియు UNG ఎంజైమ్‌కు సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి, UNG వ్యవస్థను ఉపయోగించడం వలన గుర్తించే సున్నితత్వం తగ్గితే, ప్రతిచర్య వ్యవస్థను సర్దుబాటు చేయాలి మరియు ఆప్టిమైజ్ చేయాలి, మీకు సాంకేతిక మద్దతు అవసరమైతే, దయచేసి సంప్రదించండి. మా సంస్థ.
