యూనివర్సల్ SYBR గ్రీన్ qPCR ప్రీమిక్స్ (నీలం)

పిల్లి సంఖ్య: HCB5041B

యూనివర్సల్ బ్లూ qPCR మాస్టర్ మిక్స్ (డై బేస్డ్) అనేది 2×రియల్-టైమ్ క్వాంటిటేటివ్ PCR యాంప్లిఫికేషన్‌కు ముందస్తు పరిష్కారం, ఇది అధిక సున్నితత్వం మరియు నిర్దిష్టతతో వర్ణించబడుతుంది, నీలం రంగులో ఉంటుంది మరియు నమూనా జోడింపు ట్రేసింగ్ ప్రభావాన్ని కలిగి ఉంటుంది.నమూనా తయారీ సమయంలో ప్రైమర్ ఎనియలింగ్ కారణంగా నాన్-స్పెసిఫిక్ యాంప్లిఫికేషన్‌ను సమర్థవంతంగా నిరోధించడానికి కోర్ కాంపోనెంట్ Taq DNA పాలిమరేస్ యాంటీబాడీ హాట్ స్టార్ట్‌ను ఉపయోగిస్తుంది.అదే సమయంలో, ఫార్ములా PCR ప్రతిచర్య యొక్క విస్తరణ సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరచడానికి మరియు వివిధ GC విషయాలతో (30 ~ 70%) జన్యువుల విస్తరణను సమం చేయడానికి ప్రోత్సహించే కారకాలను జోడిస్తుంది, తద్వారా పరిమాణాత్మక PCR విస్తృత పరిమాణంలో మంచి సరళ సంబంధాన్ని పొందవచ్చు. ప్రాంతం.ఈ ఉత్పత్తి ప్రత్యేక ROX పాసివ్ రిఫరెన్స్ డైని కలిగి ఉంది, ఇది చాలా qPCR సాధనాలకు వర్తిస్తుంది.వివిధ సాధనాలపై ROX యొక్క ఏకాగ్రతను సర్దుబాటు చేయడం అవసరం లేదు.యాంప్లిఫికేషన్ కోసం ప్రతిచర్య వ్యవస్థను సిద్ధం చేయడానికి ప్రైమర్‌లు మరియు టెంప్లేట్‌లను జోడించడం మాత్రమే అవసరం.

భాగాలు

యూనివర్సల్ బ్లూ qPCR మాస్టర్ మిక్స్

నిల్వ పరిస్థితులు

ఉత్పత్తి ఐస్ ప్యాక్‌లతో రవాణా చేయబడుతుంది మరియు 18 నెలల పాటు -25℃~-15℃ వద్ద నిల్వ చేయబడుతుంది.ప్రతిచర్య వ్యవస్థను నిల్వ చేసేటప్పుడు లేదా సిద్ధం చేసేటప్పుడు బలమైన కాంతి వికిరణాన్ని నివారించడం అవసరం.

స్పెసిఫికేషన్

సూచనలు

1.ప్రతిచర్య వ్యవస్థ

[గమనిక]: తీవ్రమైన వణుకు నుండి అధిక బుడగలను నివారించడానికి ఉపయోగించే ముందు పూర్తిగా కలపండి.

ఎ) ప్రైమర్ ఏకాగ్రత: చివరి ప్రైమర్ ఏకాగ్రత 0.2μmol/L, మరియు తగిన విధంగా 0.1 మరియు 1.0μmol/L మధ్య కూడా సర్దుబాటు చేయవచ్చు.

బి) టెంప్లేట్ ఏకాగ్రత: టెంప్లేట్ పలచబడని cDNA స్టాక్ సొల్యూషన్ అయితే, ఉపయోగించిన వాల్యూమ్ qPCR ప్రతిచర్య యొక్క మొత్తం వాల్యూమ్‌లో 1/10 మించకూడదు.

c) మూస పలుచన: cDNA స్టాక్ సొల్యూషన్‌ను 5-10 సార్లు పలుచన చేయాలని సిఫార్సు చేయబడింది.యాంప్లిఫికేషన్ ద్వారా పొందిన Ct విలువ 20-30 చక్రాలుగా ఉన్నప్పుడు జోడించిన టెంప్లేట్ యొక్క సరైన మొత్తం ఉత్తమం.

d) ప్రతిచర్య వ్యవస్థ: లక్ష్య జన్యు విస్తరణ యొక్క ప్రభావం మరియు పునరావృతతను నిర్ధారించడానికి 20μL లేదా 50μLని ఉపయోగించమని సిఫార్సు చేయబడింది.

ఇ) సిస్టమ్ తయారీ: దయచేసి సూపర్ క్లీన్ బెంచ్‌లో సిద్ధం చేయండి మరియు న్యూక్లీజ్ అవశేషాలు లేకుండా చిట్కాలు మరియు రియాక్షన్ ట్యూబ్‌లను ఉపయోగించండి;ఫిల్టర్ కాట్రిడ్జ్‌లతో చిట్కాలను ఉపయోగించమని సిఫార్సు చేయబడింది.క్రాస్ కాలుష్యం మరియు ఏరోసోల్ కాలుష్యాన్ని నివారించండి.

2.ప్రతిచర్య కార్యక్రమం

ప్రామాణిక ప్రోగ్రామ్

త్వరిత కార్యక్రమం

[గమనిక]: ఫాస్ట్ ప్రోగ్రామ్ అత్యధిక సంఖ్యలో జన్యువులకు అనుకూలంగా ఉంటుంది మరియు వ్యక్తిగత సంక్లిష్ట ద్వితీయ నిర్మాణ జన్యువుల కోసం ప్రామాణిక ప్రోగ్రామ్‌లను ప్రయత్నించవచ్చు.

ఎ) ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రత మరియు సమయం: దయచేసి ప్రైమర్ మరియు లక్ష్య జన్యువు యొక్క పొడవు ప్రకారం సర్దుబాటు చేయండి.

బి) ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ అక్విజిషన్ (★): దయచేసి పరికరం యొక్క ఉపయోగం కోసం సూచనలలోని అవసరాలకు అనుగుణంగా ప్రయోగాత్మక విధానాన్ని సెట్ చేయండి.

సి) మెల్టింగ్ కర్వ్: ఇన్స్ట్రుమెంట్ డిఫాల్ట్ ప్రోగ్రామ్‌ను సాధారణంగా ఉపయోగించవచ్చు.

3. ఫలితాల విశ్లేషణ 

పరిమాణాత్మక ప్రయోగాలకు కనీసం మూడు జీవ ప్రతిరూపాలు అవసరం.ప్రతిచర్య తర్వాత, యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ మరియు మెల్టింగ్ కర్వ్ నిర్ధారించబడాలి.

3.1 యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్:

ప్రామాణిక యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ S- ఆకారంలో ఉంటుంది.Ct విలువ 20 మరియు 30 మధ్య పడిపోయినప్పుడు పరిమాణాత్మక విశ్లేషణ చాలా ఖచ్చితమైనది. Ct విలువ 10 కంటే తక్కువగా ఉంటే, టెంప్లేట్‌ను పలుచన చేసి, మళ్లీ పరీక్షను నిర్వహించడం అవసరం.Ct విలువ 30-35 మధ్య ఉన్నప్పుడు, యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరచడానికి మరియు ఫలిత విశ్లేషణ యొక్క ఖచ్చితత్వాన్ని నిర్ధారించడానికి, టెంప్లేట్ ఏకాగ్రత లేదా ప్రతిచర్య వ్యవస్థ యొక్క వాల్యూమ్‌ను పెంచడం అవసరం.Ct విలువ 35 కంటే ఎక్కువగా ఉన్నప్పుడు, పరీక్ష ఫలితాలు జన్యువు యొక్క వ్యక్తీకరణను పరిమాణాత్మకంగా విశ్లేషించలేవు, కానీ గుణాత్మక విశ్లేషణ కోసం ఉపయోగించవచ్చు.

3.2 మెల్టింగ్ కర్వ్:

ద్రవీభవన వక్రరేఖ యొక్క ఒకే శిఖరం ప్రతిచర్య విశిష్టత మంచిదని మరియు పరిమాణాత్మక విశ్లేషణను నిర్వహించవచ్చని సూచిస్తుంది;ద్రవీభవన వక్రరేఖ డబుల్ లేదా బహుళ శిఖరాలను చూపిస్తే, పరిమాణాత్మక విశ్లేషణ నిర్వహించబడదు.ద్రవీభవన వక్రరేఖ డబుల్ శిఖరాలను చూపుతుంది మరియు DNA అగరోస్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా నాన్-టార్గెట్ పీక్ ప్రైమర్ డైమర్ లేదా నాన్-స్పెసిఫిక్ యాంప్లిఫికేషన్ అని నిర్ధారించడం అవసరం.ఇది ప్రైమర్ డైమర్ అయితే, ప్రైమర్ ఏకాగ్రతను తగ్గించడం లేదా అధిక యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యంతో ప్రైమర్‌లను రీడిజైన్ చేయడం మంచిది.ఇది నాన్-స్పెసిఫిక్ యాంప్లిఫికేషన్ అయితే, దయచేసి ఎనియలింగ్ ఉష్ణోగ్రతని పెంచండి లేదా నిర్దిష్టతతో ప్రైమర్‌లను రీడిజైన్ చేయండి.

గమనికలు

దయచేసి మీ ఆరోగ్యం మరియు భద్రతను నిర్ధారించడానికి అవసరమైన PPE, అటువంటి ల్యాబ్ కోటు మరియు చేతి తొడుగులు ధరించండి!

ఈ ఉత్పత్తి పరిశోధన ఉపయోగం కోసం మాత్రమే!