PNGase F
పెప్టైడ్-N-గ్లైకోసిడేస్ F(PNGase F) అనేది గ్లైకోప్రొటీన్‌ల నుండి దాదాపు అన్ని N-లింక్డ్ ఒలిగోశాకరైడ్‌లను తొలగించడానికి అత్యంత ప్రభావవంతమైన ఎంజైమాటిక్ పద్ధతి.PNGase F అనేది ఒక అమిడేస్, ఇది N- లింక్డ్ గ్లైకోప్రొటీన్‌ల నుండి అధిక మన్నోస్, హైబ్రిడ్ మరియు కాంప్లెక్స్ ఒలిగోశాకరైడ్‌ల యొక్క అంతర్గత అత్యంత GlcNAc మరియు ఆస్పరాజైన్ అవశేషాల మధ్య చీలిపోతుంది.
అప్లికేషన్
ఈ ఎంజైమ్ ప్రోటీన్ల నుండి కార్బోహైడ్రేట్ అవశేషాలను తొలగించడానికి ఉపయోగపడుతుంది.
తయారీ మరియు స్పెసిఫికేషన్
| స్వరూపం | రంగులేని ద్రవం |
| ప్రోటీన్ స్వచ్ఛత | ≥95% (SDS-PAGE నుండి) |
| కార్యాచరణ | ≥500,000 U/mL |
| ఎక్సోగ్లైకోసిడేస్ | కార్యాచరణ ఏదీ కనుగొనబడలేదు (ND) |
| ఎండోగ్లైకోసిడేస్ F1 | ND |
| ఎండోగ్లైకోసిడేస్ F2 | ND |
| ఎండోగ్లైకోసిడేస్ F3 | ND |
| ఎండోగ్లైకోసిడేస్ హెచ్ | ND |
| ప్రొటీజ్ | ND |
లక్షణాలు
| EC నంబర్ | 3.5.1.52(సూక్ష్మజీవుల నుండి పునఃసంయోగం) |
| పరమాణు బరువు | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్ | 8. 14 |
| వాంఛనీయ pH | 7.0-8.0 |
| వాంఛనీయ ఉష్ణోగ్రత | 65 °C |
| ఉపరితల విశిష్టత | GlcNAc మరియు ఆస్పరాజైన్ అవశేషాల మధ్య గ్లైకోసిడిక్ బంధాలను విడదీయడం Fig.1 |
| గుర్తింపు సైట్లు | N-లింక్డ్ గ్లైకాన్‌లు α1-3 ఫ్యూకోస్ ఫిగ్. 2 కలిగి ఉండకపోతే |
| యాక్టివేటర్లు | DTT |
| నిరోధకం | SDS |
| నిల్వ ఉష్ణోగ్రత | -25 ~-15 ℃ |
| వేడి నిష్క్రియం | 1µL PNGase F కలిగి ఉన్న 20µL ప్రతిచర్య మిశ్రమం 75 °C వద్ద 10 నిమిషాల పాటు ఇంక్యుబేషన్ ద్వారా నిష్క్రియం చేయబడుతుంది. |
Fig. 1 PNGase F యొక్క సబ్‌స్ట్రేట్ విశిష్టత
Fig. 2 గుర్తింపు PNGase F.
అంతర్గత GlcNAc అవశేషాలు α1-3 ఫ్యూకోస్‌తో అనుసంధానించబడినప్పుడు, PNGase F గ్లైకోప్రొటీన్‌ల నుండి N- లింక్డ్ ఒలిగోశాకరైడ్‌లను విడదీయదు.ఈ మార్పు మొక్కలు మరియు కొన్ని క్రిమి గ్లైకోప్రొటీన్లలో సాధారణం.
Cప్రత్యర్థులు
|
| భాగాలు | ఏకాగ్రత |
| 1 | PNGase F | 50 μl |
| 2 | 10×గ్లైకోప్రొటీన్ డీనాచరింగ్ బఫర్ | 1000 μl |
| 3 | 10×గ్లైకోబఫర్ 2 | 1000 μl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 μl |
యూనిట్ నిర్వచనం
ఒక యూనిట్(U) అనేది 10 µL మొత్తం ప్రతిచర్య పరిమాణంలో 37°C వద్ద 1 గంటలో 10 µg డీనేచర్డ్ RNase B నుండి >95% కార్బోహైడ్రేట్‌ని తొలగించడానికి అవసరమైన ఎంజైమ్ మొత్తంగా నిర్వచించబడింది.
ప్రతిచర్య పరిస్థితులు
1.1-20 µg గ్లైకోప్రొటీన్‌ను డీయోనైజ్డ్ నీటితో కరిగించి, 10 µl మొత్తం ప్రతిచర్య వాల్యూమ్‌ను చేయడానికి 1 µl 10×గ్లైకోప్రొటీన్ డీనాటరింగ్ బఫర్ మరియు H2O (అవసరమైతే) జోడించండి.
2.10 నిమిషాలు 100 ° C వద్ద పొదిగే, మంచు మీద చల్లబరచండి.
3.2 µl 10×GlycoBuffer 2, 2 µl 10% NP-40 వేసి కలపాలి.
4.1-2 µl PNGase F మరియు H జోడించండి2O (అవసరమైతే) 20 µl మొత్తం ప్రతిచర్య వాల్యూమ్‌ను తయారు చేసి కలపాలి.
5.ప్రతిచర్యను 37 ° C వద్ద 60 నిమిషాలు పొదిగించండి.
6.SDS-PAGE విశ్లేషణ లేదా HPLC విశ్లేషణ కోసం.
