DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) అనేది ఎండోడియోక్సిరిబోన్యూక్లీస్, ఇది సింగిల్ లేదా డబుల్ స్ట్రాండెడ్ DNAను జీర్ణం చేయగలదు.ఇది 5′-టెర్మినల్ వద్ద ఫాస్ఫేట్ సమూహాలతో మరియు 3′-టెర్మినల్ వద్ద హైడ్రాక్సిల్‌తో మోనోడెక్సిన్యూక్లియోటైడ్‌లు లేదా సింగిల్-లేదా డబుల్ స్ట్రాండెడ్ ఒలిగోడియోక్సిన్యూక్లియోటైడ్‌లను ఉత్పత్తి చేయడానికి ఫాస్ఫోడీస్టర్ బంధాలను గుర్తించి, విడదీస్తుంది.DNase I యొక్క కార్యాచరణ Ca2+పై ఆధారపడి ఉంటుంది మరియు Mn2+ మరియు Zn2+ వంటి డైవాలెంట్ మెటల్ అయాన్ల ద్వారా సక్రియం చేయబడుతుంది.5mM Ca2+ జలవిశ్లేషణ నుండి ఎంజైమ్‌ను రక్షిస్తుంది.Mg2+ సమక్షంలో, ఎంజైమ్ DNA యొక్క ఏదైనా స్ట్రాండ్‌లో ఏదైనా సైట్‌ను యాదృచ్ఛికంగా గుర్తించి, చీల్చగలదు.Mn2+ సమక్షంలో, DNA యొక్క ద్వంద్వ తంతువులు ఏకకాలంలో గుర్తించబడతాయి మరియు దాదాపు అదే ప్రదేశంలో క్లీవ్ చేయబడి ఫ్లాట్ ఎండ్ DNA శకలాలు లేదా 1-2 న్యూక్లియోటైడ్‌లు పొడుచుకు వచ్చిన స్టిక్కీ ఎండ్ DNA శకలాలు ఏర్పరుస్తాయి.
ఉత్పత్తి ఆస్తి
బోవిన్ ప్యాంక్రియాస్ DNase I ఈస్ట్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ సిస్టమ్‌లో వ్యక్తీకరించబడింది మరియు శుద్ధి చేయబడింది.
Cప్రత్యర్థులు
| భాగం | వాల్యూమ్ | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-రహిత | 20μL | 200μL | 1మి.లీ | 10మి.లీ |
| 10×DNase I బఫర్ | 1మి.లీ | 1మి.లీ | 5× 1మి.లీ | 5× 10మి.లీ |
రవాణా మరియు నిల్వ
1. నిల్వ స్థిరత్వం: – నిల్వ కోసం 15℃~-25℃;
2.రవాణా స్థిరత్వం: మంచు ప్యాక్‌ల కింద రవాణా;
3. ఇందులో సరఫరా చేయబడింది: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% గ్లిసరాల్, 25℃ వద్ద pH 7.6.
యూనిట్ నిర్వచనం
37°C వద్ద 10 నిమిషాలలో 1 µg pBR322 DNA పూర్తిగా క్షీణింపజేసే ఎంజైమ్ మొత్తంగా ఒక యూనిట్ నిర్వచించబడింది.
నాణ్యత నియంత్రణ
RNase:37 ℃ వద్ద 4 గంటల పాటు 1.6 μg MS2 RNAతో DNase I యొక్క 5U అగరోజ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా నిర్ణయించినట్లుగా ఎటువంటి క్షీణతను అందించదు.
బాక్టీరియల్ ఎండోటాక్సిన్:LAL-పరీక్ష, చైనీస్ ఫార్మకోపోయియా IV 2020 ఎడిషన్ ప్రకారం, జెల్ పరిమితి పరీక్ష పద్ధతి, సాధారణ నియమం (1143).బాక్టీరియల్ ఎండోటాక్సిన్ కంటెంట్ ≤10 EU/mg ఉండాలి.
ఉపయోగం కోసం సూచనలు
1.క్రింద జాబితా చేయబడిన నిష్పత్తుల ప్రకారం RNase-రహిత ట్యూబ్‌లో ప్రతిచర్య పరిష్కారాన్ని సిద్ధం చేయండి:
| భాగం | వాల్యూమ్ |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I బఫర్ | 1 μL |
| DNase I, RNase-రహిత (5U/μL) | μg RNAకి 1 U |
| ddH2O | 10 μL వరకు |
15 నిమిషాలకు 2.37 ℃;
3. ప్రతిచర్యను ఆపడానికి ముగింపు బఫర్‌ను జోడించండి మరియు DNase Iని నిష్క్రియం చేయడానికి 10 నిమిషాల పాటు 65℃ వద్ద వేడి చేయండి. నమూనా నేరుగా తదుపరి ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ ప్రయోగం కోసం ఉపయోగించబడుతుంది.
గమనికలు
1.RNA యొక్క μgకి 1U DNase I లేదా 1μg కంటే తక్కువ RNA కోసం 1U DNase Iని ఉపయోగించండి.
ఎంజైమ్ క్రియారహితం సమయంలో RNA క్షీణించకుండా రక్షించడానికి 2.EDTA 5 mM యొక్క తుది సాంద్రతకు జోడించబడాలి.
