DNase I (Rnase ఉచితం)(5u/ul)
పిల్లి సంఖ్య: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) అనేది ఎండోడియోక్సిరిబోన్యూక్లీస్, ఇది సింగిల్ లేదా డబుల్ స్ట్రాండెడ్ DNAను జీర్ణం చేయగలదు.ఇది 5'-టెర్మినల్ వద్ద ఫాస్ఫేట్ సమూహాలతో మరియు 3'-టెర్మినల్ వద్ద హైడ్రాక్సిల్‌తో మోనోడెక్సిన్యూక్లియోటైడ్‌లు లేదా సింగిల్-లేదా డబుల్ స్ట్రాండెడ్ ఒలిగోడియోక్సిన్యూక్లియోటైడ్‌లను ఉత్పత్తి చేయడానికి ఫాస్ఫోడీస్టర్ బంధాలను గుర్తించి, విడదీస్తుంది.DNase I యొక్క కార్యాచరణ Ca పై ఆధారపడి ఉంటుంది2+మరియు Mn వంటి డైవాలెంట్ మెటల్ అయాన్ల ద్వారా సక్రియం చేయవచ్చు2+మరియు Zn2+.5 mM Ca2+జలవిశ్లేషణ నుండి ఎంజైమ్‌ను రక్షిస్తుంది.Mg సమక్షంలో2+, ఎంజైమ్ DNA యొక్క ఏదైనా స్ట్రాండ్‌లో ఏదైనా సైట్‌ను యాదృచ్ఛికంగా గుర్తించి, చీల్చగలదు.Mn సమక్షంలో2+, DNA యొక్క ద్వంద్వ తంతువులు ఏకకాలంలో గుర్తించబడతాయి మరియు దాదాపు ఒకే స్థలంలో క్లీవ్ చేయబడి ఫ్లాట్ ఎండ్ DNA శకలాలు లేదా 1-2 న్యూక్లియోటైడ్‌లు పొడుచుకు వచ్చిన స్టిక్కీ ఎండ్ DNA శకలాలు ఏర్పరుస్తాయి.
భాగాలు
| పేరు | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-రహిత | 20μL | 200μL | 1మి.లీ | 10 మి.లీ |
| 10×DNase I బఫర్ | 1మి.లీ | 1మి.లీ | 5 × 1మి.లీ | 5 × 10 మి.లీ |
నిల్వ పరిస్థితులు
నిల్వ కోసం -25℃~-15℃;ఐస్ ప్యాక్‌ల కింద రవాణా.
సూచనలు
1. క్రింద జాబితా చేయబడిన నిష్పత్తుల ప్రకారం RNase-రహిత ట్యూబ్‌లో ప్రతిచర్య పరిష్కారాన్ని సిద్ధం చేయండి:
| భాగం | వాల్యూమ్ |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I బఫర్ | 1μL |
| DNase I, RNase-రహిత (5U/μL) | 1 U ప్రతి µg RNA① |
| ddH2O | 10μL వరకు |
గమనిక: ① RNA మొత్తం ఆధారంగా జోడించాల్సిన DNase I వాల్యూమ్‌ను లెక్కించండి.
2. 15 నిమిషాలకు 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM యొక్క తుది సాంద్రతకు 0.5M EDTAని జోడించండి మరియు ప్రతిచర్యను ఆపడానికి 65℃ వద్ద 10 నిమిషాలు వేడి చేయండి.రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ వంటి తదుపరి ప్రతిచర్య కోసం నమూనాను నేరుగా ఉపయోగించవచ్చుప్రయోగం.
యూనిట్ నిర్వచనం
1µg pBR322ని పూర్తిగా క్షీణింపజేసే ఎంజైమ్ మొత్తంగా ఒక యూనిట్ నిర్వచించబడింది.37℃ వద్ద 10 నిమిషాల్లో DNA.
నాణ్యత నియంత్రణ
RNase:DNase I యొక్క 5U 1.6µg MS2 RNAతో 37℃ వద్ద 4 గంటల పాటు ఎటువంటి క్షీణతను అందించదుఅగరోజ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ద్వారా నిర్ణయించబడుతుంది.
గమనికలు
1. దయచేసి 0.5మెడ్టాను మీరే సిద్ధం చేసుకోండి.
2. RNA యొక్క µgకి 1U DNase Iని ఉపయోగించండి.అయితే, RNA 1µg కంటే తక్కువ ఉంటే, దయచేసి 1U DNase Iని ఉపయోగించండి.
3. దయచేసి ఆపరేషన్ సమయంలో ఎంజైమ్‌ను మంచు మీద ఉంచండి.
