Bst 2.0 DNA పాలిమరేస్ (గ్లిసరాల్ లేనిది)
Bst DNA పాలిమరేస్ V2 బాసిల్లస్ స్టెరోథెర్మోఫిలస్ DNA పాలిమరేస్ I నుండి తీసుకోబడింది, ఇది 5′→3′ DNA పాలిమరేస్ కార్యాచరణ మరియు బలమైన చైన్ రీప్లేస్‌మెంట్ యాక్టివిటీని కలిగి ఉంది, కానీ 5′→3′ ఎక్సోన్యూకలీస్ యాక్టివిటీ లేదు.Bst DNA పాలిమరేస్ V2 స్ట్రాండ్-డిస్ప్లేస్‌మెంట్, ఐసోథర్మల్ యాంప్లిఫికేషన్ LAMP (లూప్ మధ్యవర్తిత్వ ఐసోథర్మల్ యాంప్లిఫికేషన్) మరియు వేగవంతమైన సీక్వెన్సింగ్‌కు అనువైనది.
భాగాలు
| భాగం | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNAపాలిమరేస్ V2(గ్లిసరాల్ లేనిది)(8U/μL) | 0.2 మి.లీ | 1 మి.లీ | 10 మి.లీ |
| 10×HC Bst V2 బఫర్ | 1.5 మి.లీ | 2×1.5 మి.లీ | 3×10 మి.లీ |
| MgSO4(100మి.మీ) | 1.5 మి.లీ | 2×1.5 మి.లీ | 2×10 మి.లీ |
అప్లికేషన్లు
1.LAMP ఐసోథర్మల్ యాంప్లిఫికేషన్
2.DNA స్ట్రాండ్ సింగిల్ డిస్ప్లేస్‌మెంట్ రియాక్షన్
3.హై GC జీన్ సీక్వెన్సింగ్
నానోగ్రామ్ స్థాయిని 4.DNA సీక్వెన్సింగ్.
నిల్వ పరిస్థితి
రవాణా 0°C కంటే తక్కువ మరియు -25°C~-15°C వద్ద నిల్వ చేయబడుతుంది.
యూనిట్ నిర్వచనం
ఒక యూనిట్ 65°C వద్ద 30 నిమిషాలలో 25 nmol dNTPని యాసిడ్ కరగని పదార్థంలో చేర్చే ఎంజైమ్ మొత్తంగా నిర్వచించబడింది.
నాణ్యత నియంత్రణ
1.ప్రోటీన్ స్వచ్ఛత పరీక్ష (SDS-PAGE):కూమాస్సీ బ్లూ డిటెక్షన్‌ని ఉపయోగించి SDS-PAGE విశ్లేషణ ద్వారా Bst DNA పాలిమరేస్ V2 యొక్క స్వచ్ఛత ≥99% నిర్ణయించబడుతుంది.
2.Exonuclease కార్యాచరణ:1 μg λ -Hind Ⅲ డైజెస్ట్ DNA 37 ℃ వద్ద 16 గంటల పాటు Bst DNA పాలిమరేస్ V2 యొక్క కనిష్టంగా 8 U కలిగి ఉన్న 50 μL ప్రతిచర్యను పొదిగించడం వలన నిర్ణయించిన విధంగా గుర్తించదగిన క్షీణత ఉండదు.
3.నికేస్ కార్యాచరణ:37°C వద్ద 16 గంటలపాటు 1 μg pBR322 DNAతో కనీసం 8 U Bst DNA పాలిమరేస్ V2ని కలిగి ఉన్న 50 μL ప్రతిచర్యను పొదిగించడం వలన నిర్ణయించిన విధంగా గుర్తించదగిన క్షీణత ఉండదు.
4.RNase కార్యాచరణ:1.6 μg MS2 RNAతో 16 గంటలపాటు 37°C వద్ద కనిష్టంగా 8 U Bst DNA పాలిమరేస్ V2ని కలిగి ఉన్న 50 μL ప్రతిచర్యను పొదిగించడం వలన నిర్ణయించిన విధంగా గుర్తించదగిన క్షీణత ఉండదు.
5.E. coli DNA:120 U యొక్క Bst DNA పాలిమరేస్ V2 E. coli 16S rRNA లోకస్ కోసం ప్రత్యేకమైన ప్రైమర్‌లతో TaqMan qPCRని ఉపయోగించి E. కోలి జెనోమిక్ DNA ఉనికి కోసం పరీక్షించబడింది.E. కోలి జన్యుసంబంధమైన DNA కాలుష్యం ≤1 కాపీ.
LAMP ప్రతిచర్య
| భాగాలు | 25μL |
| 10×HC Bst V2 బఫర్ | 2.5 μL |
| MgSO4 (100మి.మీ) | 1.5 μL |
| dNTP లు (ఒక్కొక్కటి 10 మిమీ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 ఆకుపచ్చ (25×)a | 1.0 μL |
| ప్రైమర్ మిక్స్b | 6 μL |
| Bst DNA పాలిమరేస్ V2 (గ్లిసరాల్ లేనిది) (8 U/uL) | 1 μL |
| మూస | × μL |
| ddH₂O | 25 μL వరకు |
గమనికలు:
1) a.SYTOTM 16 ఆకుపచ్చ (25×): ప్రయోగాత్మక అవసరాల ప్రకారం, ఇతర రంగులను ప్రత్యామ్నాయాలుగా ఉపయోగించవచ్చు;
2) బి.ప్రైమర్ మిక్స్: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB మరియు ఇతర వాల్యూమ్‌లను కలపడం ద్వారా పొందబడింది.
ప్రతిచర్య మరియు పరిస్థితి
1 × HC Bst V2 బఫర్, పొదిగే ఉష్ణోగ్రత 60°C మరియు 65°C మధ్య ఉంటుంది.
వేడి నిష్క్రియం
80 °C,20నిమి
