ఉష్ణోగ్రత సెన్సిటివ్ UNG
టెంపరేచర్ సెన్సిటివ్ UNG (TS-UNG) అనేది E. కోలిలో రీకాంబినెంట్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ద్వారా పొందబడింది.ఎంజైమ్ యురేసిల్-కలిగిన సింగిల్ మరియు డబుల్ స్ట్రాండెడ్ DNA నుండి ఉచిత యురేసిల్ విడుదలను ఉత్ప్రేరకపరుస్తుంది మరియు RNAకి వ్యతిరేకంగా క్రియారహితంగా ఉంటుంది.E. కోలి జన్యు మూలం యొక్క సాంప్రదాయ UNG ఎంజైమ్‌తో పోలిస్తే, TS-UNG ఎంజైమ్ తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద (20℃~37℃) అధిక కార్యాచరణను కలిగి ఉంటుంది మరియు ఉష్ణోగ్రతను సున్నితంగా మరియు సులభంగా నిష్క్రియం (50℃) కలిగి ఉంటుంది, dUTP-కలిగిన యాంప్లిఫికేషన్ క్షీణతను నివారిస్తుంది. సాంప్రదాయ UNG ఎంజైమ్‌ని నిష్క్రియం చేసిన తర్వాత మిగిలి ఉండే అవశేష కార్యాచరణ ద్వారా గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉత్పత్తులు.అందువల్ల, TS-UNG ఎంజైమ్ PCR కాలుష్య నివారణ ప్రతిచర్యకు మాత్రమే సరిపోదు, కానీ RT-PCR యాంప్లిఫికేషన్ ప్రోగ్రామ్‌తో బాగా సరిపోతుంది మరియు RT-PCR కాలుష్య నివారణ చర్యలో ఉపయోగించవచ్చు.
సిఫార్సు చేసిన అప్లికేషన్
కాలుష్య నివారణ విస్తరణ
నిల్వ పరిస్థితి
దీర్ఘకాలిక నిల్వ కోసం -20°C, ఉపయోగం ముందు బాగా కలపాలి, తరచుగా ఫ్రీజ్-కరిగించడం నివారించండి.
నిల్వ బఫర్
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, స్టెబిలైజర్, 50% గ్లిసరాల్.
యూనిట్ నిర్వచనం
37°C వద్ద 1 గంటలో dU బేస్‌లను కలిగి ఉన్న 1µg సింగిల్ స్ట్రాండెడ్ DNA యొక్క క్షీణతకు అవసరమైన ఎంజైమ్ మొత్తం 1 యూనిట్ యాక్టివిటీ (U).
నాణ్యత నియంత్రణ
1.SDS-PAGE ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ స్వచ్ఛత 98% కంటే ఎక్కువ
2.అధోకరణ కార్యాచరణ, బ్యాచ్-టు-బ్యాచ్ నియంత్రణ, స్థిరత్వం
3.ఎక్సోజనస్ న్యూక్లీస్ యాక్టివిటీ లేదు, ఎక్సోజనస్ ఎండోన్యూకలీస్ లేదా ఎక్సోన్యూకలీస్ కాలుష్యం లేదు.
సూచనలు
| భాగాలు | వాల్యూమ్ (μL) | చివరి ఏకాగ్రత |
| 10 × PCR బఫర్ (dNTP ఉచితం, Mg²+ఉచిత) | 5 | 1× |
| dUTPలు (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP స్థానంలో) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 మి.మీ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × ప్రైమర్ మిక్స్a | 2 | 1× |
| మూస | - | 1μg/ప్రతిచర్య |
| ddH₂O | 50 వరకు | - |
గమనిక: a: qPCR/qRT-PCR కోసం ఉపయోగించినట్లయితే, ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోబ్‌ను రియాక్షన్ సిస్టమ్‌లో చేర్చాలి.సాధారణంగా, 0.2 μM యొక్క తుది ప్రైమర్ ఏకాగ్రత మంచి ఫలితాలను ఇస్తుంది;ప్రతిచర్య పనితీరు తక్కువగా ఉన్నప్పుడు, ప్రైమర్ ఏకాగ్రతను 0.2-1 μM పరిధిలో సర్దుబాటు చేయవచ్చు.సాధారణంగా, ప్రోబ్ ఏకాగ్రత 0.1-0.3 μM పరిధిలో ఆప్టిమైజ్ చేయబడుతుంది.ప్రైమర్ మరియు ప్రోబ్ యొక్క ఉత్తమ కలయికను కనుగొనడానికి ఏకాగ్రత ప్రవణత ప్రయోగాలు చేయవచ్చు.
గమనికలు
1.TS-UNG ఎంజైమ్ యొక్క సరైన ప్రతిచర్య ఉష్ణోగ్రత సాపేక్షంగా తక్కువగా ఉంటుంది మరియు దీనిని 20℃~37℃ పరిధిలో ఆప్టిమైజ్ చేయవచ్చు, ఎంజైమ్ యొక్క మోతాదు మరియు ప్రతిచర్య సమయాన్ని 0.1~0.5 U, 5~ పరిధిలో ఆప్టిమైజ్ చేయవచ్చు. 10 నిమి;మరియు రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ ప్రక్రియలో ఎంజైమ్ నిష్క్రియం చేయబడుతుంది.
2.కాలుష్యాన్ని నివారించడానికి ఇది PCR మరియు RT-PCR లకు అనుకూలంగా ఉంటుంది.
3.తరచుగా ఫ్రీజ్-కరగడాన్ని నివారించండి మరియు పెద్ద ఉష్ణోగ్రత హెచ్చుతగ్గులకు గురికావద్దు.
4.విస్తరించాల్సిన వివిధ జన్యువులు dUTP యొక్క విభిన్న వినియోగ సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉంటాయి మరియు UNG ఎంజైమ్‌కు సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటాయి, కాబట్టి, UNG వ్యవస్థను ఉపయోగించడం వలన గుర్తించే సున్నితత్వం తగ్గితే, ప్రతిచర్య వ్యవస్థను సర్దుబాటు చేయాలి మరియు ఆప్టిమైజ్ చేయాలి, మీకు సాంకేతిక మద్దతు అవసరమైతే, దయచేసి సంప్రదించండి. మా సంస్థ.
