M-MLV రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్
RevScript రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ జన్యు ఇంజనీరింగ్ సాంకేతికత ద్వారా పొందబడింది.ఇది అధిక cDNA సంశ్లేషణ సామర్థ్యం, ఉష్ణ స్థిరత్వం మరియు ప్రతిచర్య ఉష్ణోగ్రత పరిమితి (60°C వరకు) కలిగి ఉంటుంది.సంశ్లేషణ చేయబడిన cDNA ఉత్పత్తి 10 kb వరకు ఉంటుంది.ఇది టెంప్లేట్‌ల అనుబంధాన్ని పెంచుతుంది మరియు సంక్లిష్ట ద్వితీయ నిర్మాణం లేదా తక్కువ కాపీ జన్యువులతో RNA టెంప్లేట్‌ల రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్‌కు అనుకూలంగా ఉంటుంది.
భాగాలు
| భాగం | HC2003బి-01 (10,000U) | HC2003బి-02 (5*10,000U) | HC2003బి-03 (200,000U) |
| RevScript రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 మి.లీ |
| 5 × RevScript బఫర్ | 250 μL | 1.25 మి.లీ | 5 మి.లీ |
నిల్వ పరిస్థితి
ఈ ఉత్పత్తిని -25°C~-15°C వద్ద 2 సంవత్సరాలు నిల్వ చేయాలి.
యూనిట్ నిర్వచనం
ఒక యూనిట్ ఒలిగో(dT)ని ప్రైమర్‌లుగా ఉపయోగించి 37°C వద్ద 10 నిమిషాలలో యాసిడ్-కరగని పదార్థంలో 1 nmol dTTPని కలుపుతుంది.
ప్రతిచర్య సెటప్
1.RNA టెంప్లేట్ యొక్క డీనాటరేషన్ (ఈ దశ ఐచ్ఛికం, RNA టెంప్లేట్ యొక్క డీనాటరేషన్ ద్వితీయ నిర్మాణాలను తెరవడానికి సహాయపడుతుంది, ఇది మొదటి స్ట్రాండ్ cDNA యొక్క దిగుబడిని మెరుగుపరుస్తుంది.)
| భాగాలు | వాల్యూమ్ (μL) |
| RNase ఉచిత ddH2O | 13 వరకు |
| ఒలిగో(dT)18 (50 μmol/L) లేదా రాండమ్ ప్రైమర్ (50 μmol/L) లేదా జీన్ స్పెసిఫిక్ ప్రైమర్‌లు (2 μmol/L) | 1 |
| లేదా 1 | |
| లేదా 1 | |
| RNA టెంప్లేట్ | Xa |
గమనికలు:
1) a: మొత్తం RNA: 1-5 ug లేదా mRNA: 1-500 ng
2) 65°C వద్ద 5 నిమిషాల పాటు పొదిగేలా చేసి, ఆపై 2 నిమిషాలు చల్లబరచడానికి వెంటనే మంచు మీద బదిలీ చేయండి.ప్రతిచర్య ద్రవాన్ని సేకరించడానికి సంక్షిప్త సెంట్రిఫ్యూగేషన్, కింది పట్టికలో చూపిన విధంగా రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ రియాక్షన్ సొల్యూషన్‌ను జోడించండి.కలపడానికి శాంతముగా పైపెట్.
1.ప్రతిచర్య మిశ్రమం యొక్క తయారీ (20 μL వాల్యూమ్)
| భాగాలు | వాల్యూమ్ (μL) |
| మునుపటి దశ యొక్క మిశ్రమం | 13 |
| 5×బఫర్ | 4 |
| dNTP మిక్స్ (10nmol/L) | 1 |
| రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ (200 U/μL) | 1 |
| RNase ఇన్హిబిటర్ (40 U/μL) | 1 |
1.కింది పరిస్థితులలో ప్రతిచర్యను నిర్వహించండి:
| ఉష్ణోగ్రత (°C) | సమయం |
| 25 °Ca | 5 నిమిషాలు |
| 42 °Cb | 15-30 నిమిషాలు |
| 85 °Cc | 5 నిమిషాలు |
గమనికలు:
1) a.యాదృచ్ఛిక హెక్సామర్‌లను ఉపయోగించడం కోసం మాత్రమే 25°C వద్ద 5నిమిషాల పాటు పొదిగే అవసరం.Oligo (dT) ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు దయచేసి ఈ దశను దాటవేయండి18లేదా జీన్ స్పెసిఫిక్ ప్రైమర్.
2) బి.సిఫార్సు చేయబడిన రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ ఉష్ణోగ్రత 42°C, సంక్లిష్టమైన ద్వితీయ నిర్మాణాలు లేదా అధిక GC కంటెంట్ ఉన్న టెంప్లేట్‌ల కోసం, ప్రతిచర్య ఉష్ణోగ్రతను 50-55°Cకి పెంచాలని సిఫార్సు చేయబడింది.
3) సి.రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్‌ని నిష్క్రియం చేయడానికి 85°C వద్ద 5నిమిషాల పాటు వేడి చేయడం.
4) ఉత్పత్తిని నేరుగా PCR లేదా qPCR ప్రతిచర్యలలో ఉపయోగించవచ్చు లేదా స్వల్పకాలిక నిల్వ కోసం -20°C వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు.ఉత్పత్తులను అలిగ్యుట్ చేయాలని మరియు దీర్ఘకాలిక నిల్వ కోసం -80 ° C వద్ద నిల్వ చేయాలని సిఫార్సు చేయబడింది.తరచుగా ఫ్రీజ్-కరిగించడం మానుకోండి.
5) ఉత్పత్తి ఒక-దశ RT-qPCRకి అనుకూలంగా ఉంటుంది, ప్రతి 25μL రియాక్షన్ సిస్టమ్‌కు 10-20 U రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ జోడించాలని లేదా వాస్తవ పరిస్థితికి అనుగుణంగా రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ మొత్తాన్ని క్రమంగా పెంచాలని సిఫార్సు చేయబడింది.
గమనికలు
1.దయచేసి ప్రయోగాత్మక ప్రాంతాన్ని శుభ్రంగా ఉంచండి;ఆపరేషన్ సమయంలో శుభ్రమైన చేతి తొడుగులు మరియు ముసుగులు ధరించాలి.RNase కాలుష్యాన్ని నిరోధించడానికి ప్రయోగంలో ఉపయోగించిన అన్ని వినియోగ వస్తువులు RNase రహితంగా ఉండాలి.
2.ఆర్‌ఎన్‌ఏ క్షీణతను నివారించడానికి అన్ని విధానాలు మంచు మీద చేయాలి.
3.రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్షన్ యొక్క అధిక సామర్థ్యాన్ని నిర్ధారించడానికి అధిక నాణ్యత గల RNA నమూనాలు సిఫార్సు చేయబడ్డాయి.
4.ఈ ఉత్పత్తి పరిశోధన ఉపయోగం కోసం మాత్రమే.
5.దయచేసి మీ భద్రత కోసం ల్యాబ్ కోట్లు మరియు డిస్పోజబుల్ గ్లోవ్స్‌తో ఆపరేట్ చేయండి.
